研究目的神经病理性疼痛是由中枢或周围神经损伤引起的一种慢性疼痛,其基础是中枢神经系统的敏化。神经损伤可诱发各种免疫炎症因子释放,激活细胞内信号传导通路导致痛觉过敏。神经病理性疼痛的发病机制复杂,且至今没有有效的治疗方法,严重影响病人的生活质量,其发病机制和治疗方法仍然是世界范围内的临床难题。γ-氨基丁酸（GABA）能中间神经元在抑制疼痛传导过程中发挥至关重要的作用。在脊髓水平,Toll样受体4（TLR4）和小胶质细胞参与痛觉敏感的形成和发展。本研究旨在探索TLR4介导的小胶质细胞激活影响GABA能神经元的活动在神经病理性疼痛中的作用。研究方法1、通过坐骨神经结扎（chronic constriction injury,CCI）创建神经病理性疼痛的模型,并测定坐骨神经结扎后不同时间点的机械性痛阈和热痛阈。western blot测定坐骨神经结扎和TLR4激动剂LPS对小鼠脊髓TLR4表达的影响。并通过鞘内注射TLR4激动剂LPS的方法并测定不同时间点小鼠机械性痛阈的改变评估TLR4对神经病理性疼痛的作用。2、通过创建坐骨神经结扎模型,鞘内注射TLR4抑制剂TAK-242和小胶质细胞激活抑制剂米诺环素（Minocycline）,用免疫荧光的方法比较小鼠两侧脊髓背角小胶质细胞的活化情况并做统计学分析。同时,通过直接鞘内注射LPS的方法,伴随鞘内注射TLR4抑制剂TAK-242和小胶质细胞激活抑制剂米诺环素（Minocycline）,用免疫荧光的方法比较小鼠两侧脊髓背角小胶质细胞的活化情况并做统计学分析3、通过创建坐骨神经结扎和鞘内注射LPS的模型,并对模型小鼠进行鞘内注射TLR4抑制剂TAK-242、小胶质细胞激活抑制剂和GABAA受体激动剂蝇蕈醇（muscimol）后测定机械性痛阈,并分析脑脊液内GABA的浓度改变,脊髓背角GABA能神经元的活性（谷氨酸脱羧酶65（GAD65））以及电生理技术记录LPS对GABA能神经元抑制性突触后电流（s IPSC）的影响。结果1、坐骨神经结扎后小鼠的机械性痛阈和热痛阈显著降低,痛觉过敏形成,模型创建成功。Western blot显示TLR4表达在神经病理性疼痛模型小鼠脊髓背角增加,同时直接鞘内注射TLR4激动剂LPS同样能够形成小鼠的痛觉过敏。2、坐骨神经结扎后小鼠的脊髓背角小胶质细胞活化明显,且TLR4抑制剂TAK-242和小胶质细胞激活抑制剂米诺环素均有效抑制坐骨神经结扎和LPS鞘内注射小鼠中小胶质细胞的活化3、坐骨神经结扎和LPS鞘内注射均能够诱发明显的痛觉过敏形成,且可被TAK-242、米诺环素和蝇蕈醇所抑制。此外,TAK-242和米诺环素同样能够抑制坐骨神经结扎和LPS鞘内注射导致的小鼠脊髓背角GAD65、GABA浓度的降低,而且LTR4能够介导脊髓背角抑制性突触后电流的减弱。结论本研究可得出如下结论:TLR4通过活化小胶质细胞抑制神经病理性疼痛中GABA能神经元的活动,从而参与神经病理性疼痛的发生发展。