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第一部分LPS诱导小鼠ALI线粒体动力学及细胞凋亡的动态变化背景:脓毒症性肝损伤发病率较高,其发病机制复杂,与脓毒症的预后具有重要关系。大量研究发现线粒体动力学变化与线粒体功能及细胞凋亡具有密切关系,在肝损伤的发生发展中具有重要作用。目的:观察在LPS诱导小鼠急性肝损伤不同时期的线粒体动力学、线粒体功能及细胞凋亡的动态变化。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为6组:正常组、模型1小时组、模型3小时组、模型6小时组、模型12小时组及24小时组,每组10只,采用LPS 30mg/kg腹腔注射造模,LPS注射相应时间后,留取血清标本,检测ALT、AST水平;观察肝脏的大体形态;HE染色,进行肝组织病理程度分析;采用酶联免疫法检测肝组织的ATP产量,MRCCI及Cyt-c含量;采用Real-Time PCR检测肝组织Drp1、Mfn2、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA的表达。结果:(1)与正常组比较,3小时组小鼠血清ALT水平(81.85±12.07 vs 55.58±11.64,p<0.01)、AST水平(295.28±25.83 vs157.90±52.97,p<0.01)明显升高;线粒体ATP和MRCCI(36.09±12.88vs 49.58±19.79和24.02±13.96 vs 28.06±10.86,p>0.05)有所下降,但差异无统计学意义,但Cyt-c(4.87±0.65 vs 0.55±0.23,p<0.01)明显增高;肝细胞损伤的病理指数(0.22±0.10 vs 0,p<0.05)明显升高。与正常组比较,6小时组小鼠血清alt水平(96.28±9.71vs55.58±11.64,p<0.01)、ast水平(484.80±175.33vs157.90±52.97,p<0.01)明显升高;线粒体atp和mrcci(23.99±10.2vs49.58±19.79和11.74±8.63vs28.06±10.86,p<0.05)明显下降,cyt-c(6.49±1.07vs0.55±0.23,p<0.01)明显增高;肝细胞损伤的病理指数(0.79±0.27vs0,p<0.05)明显升高。与6小时组比较,12小时组小鼠血清alt水平(62.30±13.94vs96.28±9.71,p<0.01)、ast水平(190.04±106.53vs484.80±175.33,p<0.01)明显下降;线粒体atp和mrcci(40.09±8.71vs23.99±10.2和25.84±10.25vs11.74±8.63,p<0.05)明显上升,cyt-c(3.39±0.39vs6.49±1.07,p<0.01)明显减少;肝细胞损伤的病理指数(0.36±0.18vs0.79±0.27,p<0.05)明显下降。与6小时组比较,24小时组小鼠血清alt水平(54.75±7.36vs192.03±27.33,p<0.001)、ast水平(190.04±106.53vs484.80±175.33,p<0.05)明显下降;线粒体atp和mrcci(45.53±16.69vs23.99±10.2和29.41±7.70vs11.74±8.63,p<0.01和p<0.05)明显上升,cyt-c(1.89±0.58vs6.49±1.07,p<0.01)明显减少;肝细胞损伤的病理指数(0.10±0.04vs0.79±0.27,p<0.05)明显下降。(2)与正常组比较,3小时组小鼠肝组织drp1mrna(0.56±0.10vs0.46±0.15,p>0.05)有所上升,但差异无统计学意义;小鼠肝组织mfn2mrna(0.71±0.27vs1.15±0.30,p<0.01)明显下降;小鼠肝组织bcl-2mrna(0.42±0.19vs1.13±0.25,p<0.01)明显下降;而baxmrna和caspase3mrna(0.77±0.52vs0.52±0.11和0.56±0.22vs0.49±0.06,p>0.05)有所上升,但差异无统计学意义。与正常组比较,6小时组小鼠肝组织drp1mrna(0.85±0.13vs0.46±0.15,p<0.01)明显上升;小鼠肝组织mfn2mrna(0.49±0.11vs1.15±0.30,p<0.01)明显下降;小鼠肝组织bcl-2mrna(0.28±0.08vs1.13±0.25,p<0.01)明显下降;而baxmrna和caspase3mrna(1.73±0.72vs0.52±0.11和0.89±0.12vs0.49±0.06,p<0.01)明显上升。与6小时组比较,12小时组小鼠肝组织drp1mrna(0.66±0.11vs0.85±0.13,p<0.01)明显下降;小鼠肝组织mfn2mrna(0.80±0.07vs0.49±0.11,p<0.01)明显上升;小鼠肝组织bcl-2mrna(0.33±0.11vs0.28±0.08,p>0.05)有所上升,但差异无统计学意义;而baxmrna和caspase3mrna(1.20±0.41vs1.73±0.72和0.51±0.20vs0.89±0.12,p>0.05)有所下降,但差异无统计学意义。与6小时组比较,24小时组小鼠肝组织drp1mrna(0.36±0.07vs0.85±0.135,p<0.01)明显下降;小鼠肝组织mfn2mrna(1.05±0.31vs0.49±0.11,p<0.01)明显上升;小鼠肝组织bcl-2mrna(0.64±0.16vs0.28±0.08,p<0.01)明显上升;caspase3mrna(0.21±0.13vs0.89±0.12,p<0.01)显著下降;而baxmrna(1.34±0.43vs1.73±0.72,p>0.05)有所下降,但差异无明显统计学意义。结论:drp1表达增加和mfn2表达减少等线粒体动力学失衡导致线粒体功能障碍和促发细胞线粒体凋亡途径可能是小鼠ali的发病机制之一。第二部分mdivi-1靶向干预对lps诱导小鼠ali线粒体动力学及细胞凋亡的影响背景:线粒体动力学的变化受到一系列分裂蛋白及融合蛋白的调控,线粒体分裂过度导致的大量caspase3释放,诱发bcl-2家族介导的线粒体凋亡途径引起细胞的调亡和坏死;drp1的特异性阻断剂mdivi-1能阻断线粒体分裂过度,从而减轻细胞的凋亡与坏死。目的:研究mdivi-1阻断drp1对lps诱导小鼠急性肝损伤模型的保护作用,探索脓毒症性肝损伤新的治疗策略。方法:将40只c57bl/6小鼠随机分为4组:正常组、模型6小时组、助溶剂(dmso)组及50mg/kgmdivi-1/dmso干预组,每组10只。干预组腹腔注射mdivi-1/dmso半小时后造模同上;dmso组腹腔注射dmso0.1ml半小时后造模;造模第6小时处死全部存活小鼠,检测血清alt、ast水平;he染色观察肝组织病理;atp产量,mrcci及cyt-c含量采用酶联免疫法检测;drp1、mfn2、bcl-2、bax、caspase-3mrna采用real-timepcr检测。结果:与模型组比较,mdivi-1干预组小鼠肝组织线粒体的atp和mrcci(40.07±10.96vs24.00±10.20和33.28±4.79vs11.74±8.63,p<0.05)明显上升,cyt-c(2.91±1.32vs6.49±1.07,p<0.01)明显下降;肝细胞损伤的病理指数(0.10±0.05vs0.79±0.27,p<0.05)明显下降。小鼠肝组织drp1mrna(1.29±0.31vs1.72±0.42,p<0.05)明显下降;小鼠肝组织mfn2mrna(1.51±0.38vs1.13±0.26,p<0.01)明显上升;小鼠肝组织bcl-2mrna(4.17±1.30vs1.86±1.15,p<0.01)明显上升;而Bax mRNA和Caspase3 mRNA(0.62±0.14 vs 2.56±2.01和0.52±0.22 vs 0.99±0.16,p<0.01)明显下降。结论:Mdivi-1靶向阻断Drp1,调控线粒体的动力学平衡,可能是保护小鼠ALI的机制之一。