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咬合创伤是口腔常见病之一,咬合创伤造成牙周、牙体、咀嚼肌、颞下颌关节等组织结构的损伤,临床可出现创伤牙的疼痛也可出现口颌面部疼痛。对咬合创伤引起的口颌面痛进行咬合调整,疼痛的症状能缓解,说明咬合创伤是口面痛的病因之一。疼痛是一种感觉,也是在中枢神经系统调节下的复杂的神经行为过程,疼痛的外周反应与疼痛因子、炎症细胞、血管及感觉神经等因素有关。神经生长因子(nerve growth factor,NGF)能敏化伤害性感受器、诱导机械和热痛觉过敏,组织损伤时局部NGF含量的升高在病理性痛特别是慢性疼痛的发生机制中起着重要作用。咬合创伤对口颌系统是一种慢性伤害性刺激,咬合创伤如何引发口面痛、NGF是否参与咬合创伤时外周组织的损伤过程、NGF是否在维持咬合创伤致初级感觉中枢敏化过程中起作用、以及NGF可能通过何种机制参与咬合创伤性疼痛反应等问题目前尚不清楚。 本研究的目的是在建立咬合创伤动物模型的基础上,探讨咬合创伤时,NGF及其受体TrkA(tyrosine kinase receptor)在牙周、牙髓等外周组织中的改变;探讨NGF对三叉神经节(trigeminal ganglion,TG)内前速激态原A(preprotaehykinin A,PPTA)基因的调控;研究咬合创伤对三叉神经脊束核尾侧亚核(caudal spinal trigeminal neuclus,Vc)兴奋性的影响,为认识咬合创伤与口颌面疼痛的关系及咬合创伤性疼痛的发生机制提供依据。 材料与方法 将高出咬合面1.5mm的镍铬合金嵌体粘固于15只杂种犬右侧上颌第一、第二磨牙咬合面的Ⅰ类嵌体洞形内,造成对胎牙的创伤.咬合创伤后3、7、14、30、60天取材,拍摄创伤侧磨牙根尖X片,取左右侧磨牙牙周、牙髓、三叉神经节和三叉神经脊束核尾侧亚核等组织。以创伤对侧为对照侧,戴嵌体但无咬合高点的犬(n=3)为对照组,采用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerasa chain reaction,RT-PCR)、双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)及Western-Blotting等方法检测牙周、牙髓等外周组织中NGF、trkA mRNAs的表达及相应蛋白质合成的变化;检测PPTA、trkA及c-fos mRNAs等致痛因子在TG和Vc中随创伤时间的改变。 结果 一、NGF及TrkA在咬合创伤时牙周组织中的变化 1.对照组犬左右侧磨牙牙周组织中NGF mRNA和TrkA mRNA有轻度的表达,经条带密度比值统计分析,左右两侧mRNA的表达水平无显著差异(P>0.05)。咬合创伤3天起,创伤侧磨牙牙周组织内NGF mRNA急剧升高,14~30天表达水平最高,30天时NGFmRNA是对照侧及对照组的3倍,60天时表达量下降.3~7天对照侧牙周组织NGFmRNA也上调(P<0.05)。 2.TrkAmRNA表达水平的变化规律同NGF mRNA,但表达量较NGF mRNA弱,30天时TrkA mRNA表达水平最高。 3.观测时间内,创伤侧牙周组织NGF和TrkA mRNAs的表达水平明显高于对侧(P<0.01),而且分别从咬合创伤3天及7天起高于对照组(P<0.05)。解放军军医进修学院博士后研究工作报告4.创伤侧牙周组织NGF蛋白含量3一30天持续上升(P<0.01),30天时NGF蛋白表达水平 最高,约为对照侧的6倍、对照组的9倍,60天时下降但仍显著高于对照侧及对照组。 NGF在创伤对侧牙周组织中略有增加,7天与30天时升高较明显。Westem一bfotting显 示TrkA蛋白在14天创伤侧牙周组织中的表达强于对照组。二、NGF及TrkA在咬合创伤时牙髓组织中的改变1.对照组犬磨牙牙髓组织中有少量的NGF mRNA及NGF蛋白。创伤侧牙髓组织NGF mRNA、trkA mRNA及NGF蛋白自咬合创伤7天后上调,14天时创伤侧牙髓组织NGF、 trkA mRNAs表达及NGF合成达到最高水平,14天时NGF mRNA是对照侧的5倍、 对照组的10倍。NGF蛋白含量是对照侧的2倍、对照组的9倍(P<0.01)。2.除3天组外,其余观察时间点创伤侧的NGF、trkA mRNAs及NGF合成量都显著高于 对照侧(P<0.01)。对照侧牙髓组织NGF mRNA和trkA mRNA分别在7一14天及7一30 天内表达增强。3.左右侧牙髓NGF mRNA表达及蛋白合成量分别于7一14天及7一30天时高于对照组 护<0.05),60天组左右侧NGF、廿kA mRNAs表达下降但仍较对照组高护切.05)。三、咬合创伤对TrkA和PPI谈mRNAs在三叉神经节内表达的影响1.创伤后3一60天,创伤侧三叉神经节内肠kA和PPTA mRNAs表达水平比对侧明显上调 (P<0.001),7天时两者表达水平最高,竹kA mRNA是对照侧的3.7倍,PPTA mRNA 是对照侧的1.25倍。2.创伤侧肠kA mRNA的表达量在3一60天内高于对照组(P<0.01),7一30天内维持较高水 平。3一30天内PPTA mRNA水平明显高于对照组(P<0.01),3一14天保持高表达,60天 组与对照无差异。咬合创伤7天时,介kA mRNA是对照组的7.3倍,PPTA mRNA是 对照组的2.1倍。对照侧三叉神经节的竹kA和PPTA mRNA分别在3一7天和3一14天 内表达增强。四、咬合创伤对初级感觉中枢的敏化1.对照犬V。内有极少量PPTA和。一fos mRNA的表达;咬合创伤3天后,创伤侧V。内 PPTA mRNA表达开始上调,14天时表达水平最高并持续至30天,其后开始下降,60 天组与对照组无显著差异。3一30天内实验组创伤侧PPTA