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[目的]
通过研究酪氨酸激酶抑制剂(PTK787)对人慢性粒细胞白血病急变期细胞系K562细胞增殖、细胞周期以及FAKmRNA表达的影响,探讨FAK在髓系白血病发生发展中的作用,试图在分子靶向水平寻找白血病治疗新的思路。
[方法]
(1)体外培养白血病细胞株K562细胞,取对数生长期的细胞用于实验研究。
(2)应用MTT法观察PTK787对K562细胞增殖的影响。
(3)流式细胞术检测PTK787对K562细胞周期的影响。
(4)应用RT-PCR技术检测PTK787作用前后K562细胞FAKmRNA表达水平的变化。
[结果]
(1)MTT法结果显示:随着PTK787浓度增加与作用时间延长,K562细胞的增殖抑制率逐渐升高。同一时间不同浓度组之间比较,或者同一浓度不同时间组之间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)。其中PTK787作用48小时,浓度320μmol/L对细胞抑制率最高,继续增加浓度或延长作用时间抑制率增加不明显。
(2)流式细胞仪显示:随着PTK787浓度增加,G1期细胞比率逐渐升高,S期细胞比率逐渐下降,各组间比较有明显差异(P＜0.05)。药物浓度由160μmol/L继续升高,K562细胞周期的G1期、S期改变不明显。
(3)RT-PCR技术检测不同浓度PTK787对K562细胞FAKmRNA表达水平的影响,发现随着PTK787浓度增加,K562细胞的FAKmRNA表达逐渐降低,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。药物浓度由160μmol/L继续升高,K562细胞FAKmRNA表达的改变亦不明显。
[结论]
(1)PTK787对白血病K562细胞的增殖有抑制作用。
(2)白血病K562细胞细胞处于S期比率高,PTK787可以降低S期细胞比率、阻止K562细胞周期由G1期向S期转换。
(3)髓系白血病存在FAK异常表达,PTK787可降低FAKmRNA的表达水平,从而降低白血病K562细胞增殖能力。