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目的:探讨MRSA中MecA基因表达水平、PBP2a蛋白质水平对β-内酰胺类抗生素耐药的机制与作用,从分子生物学水平研究MRSA的耐药机理。
方法:利用头孢西丁纸片法筛选MRSA,提取MRSA细菌RNA,逆转录成cDNA,Real-Time实时荧光PCR检测MecA基因的表达水平,单克隆乳胶凝集稀释法检测PBP2a效价,琼脂稀释法检测MRSA对头孢西丁、苯唑西林、头孢唑啉、阿米卡星、左旋氧氟沙星、阿奇霉素、复方新诺明、多西环素、万古霉素、利奈唑胺的最低抑菌浓度。
结果:
1.根据MRSA对头孢西丁的耐药水平,40株MRSA分为低水平耐药组(12株)、中水平耐药组(15株)、高水平耐药组(13株)。
2.相对内参基因水平,MecA基因的表达水平在MRSA低水平耐药组、中水平耐药组、高水平耐药组分别为:58.87±30.30、363.37±200.05、1257.72±446.63,三组PBPB2a的效价分别为1:1、1:2～1:4、1:4～1:16。
3.PBP2a在同一效价水平,MRSA的MecA基因的表达水平差异较大,对头孢西丁的耐药水平相差2～3个稀释度。
4.MRSA对头孢西丁、苯唑西林、头孢唑林的耐药率为100.0％,对阿米卡星、左旋氧氟沙星、阿奇霉素、复方新诺明、多西环素的耐药率分别为45.0％、62.5％、65.0％、37.5％、30.0％,没有检测到对万古霉素、利奈唑胺耐药的MRSA,但40株MRSA万古霉素的MIC90为2.0/μg/ml。
结论:
1.MecA基因的表达水平与PBP2a的含量成正相关,PBP2a的含量在一定浓度范围内,与MRSA对头孢西丁的耐药水平成正相关;
2.PBP2a含量与MRSA对头孢西丁的耐药水平受多种因素的综合影响;
3.MRSA具有高耐药与多重耐药的特征,MRSA对万古霉素的敏感性在下降。