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[目的]
建立基于PCR/RDB技术的用于能同时检测中国人群常见11种G6PD基因突变类型的诊断膜芯片检测体系并应用于临床基因诊断。
[方法]
1.样本准备用于本研究的11种G6PD基因突变类型，8种突变类型样本已在临床收集到，分别为:A95G、G392T、G871A、C1004T、C1024T、G1376T、G1381A、G1388A;3种未收集到的突变类型采用人工诱变方法合成，分别为:C1004A、C1360T、 C1387T。
2.针对中国人群常见的11种G6PD突变类型(A95G、G392T、G871A、C1004T、C1004A、C1024T、C1360T、G1376T、G1381A、C1387T、G1388A)，设计PCR扩增引物和寡核苷酸检测探针。
3.采用全血基因组提取试剂盒提取外周血样本基因组DNA，进行多重PCR扩增，在紫外透射仪上观察结果。
4.反向斑点杂交及显色将探针按设计的模式固定于尼龙膜上，用生物素标记的扩增产物与处理后的膜杂交。
5.测序验证将样品DNA分别进行扩增，产物用相应的正向引物测序。此测序结果作为G6PD基因突变检测的金标准，以衡量反向点杂交法检测结果的可靠性。
[结果]
1.反向斑点杂交的结果用11种已知突变样品作验证，显色结果与设计预期相符合，说明本研究建立的反向点杂交检测方法可用于G6PD11种突变类型的检测。
2.方法学验证结果243例临床样品采取双盲法进行反向点杂交法检测和测序法检测，结果显示两种方法结果完全一致，即:以测序法为金标准，反向点杂交法检测的符合率为100％。213例G6PD缺乏样品中，本项目检出204例突变，突变检出率为95.8％，最常见的3种突变类型为G1376T、G1388A、A95G;有3种突变类型未检出，分别为:C1004A、C1360T、C1387T。
[结论]
本研究建立的G6PD基因检测方法结果准确可靠，方法简便快速。本次实验的G6PD突变检出率为95.8％，适合于在临床广泛推广使用。