东亚飞蝗免疫与繁殖相关基因表达分析

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东亚飞蝗(Locusta migratoria)是世界性的农业害虫,对农业危害严重。线纹折麻蝇(Blaesoxipha lapidosa)是一种蝗虫寄生性蝇类,可寄生多种蝗虫。本文通过寻找东亚飞蝗免疫与繁殖相关表达基因,来研究线纹折麻蝇幼虫与东亚飞蝗的寄生关系,以及东亚飞蝗免疫与繁殖之间的权衡关系,为更好的理解东亚飞蝗在生态环境中的适应策略提供理论基础。本文利用第二代高通量测序技术,对注射葡聚微珠、人工感染藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、人工寄生线纹折麻蝇幼虫后的东亚飞蝗雌成虫的卵巢与脂肪体混合建库测序,获得8G的东亚飞蝗卵巢与脂肪体混合的转录组数据库。并采用两种方法——无参拼接法和有参拼接法对转录组数据库进行拼接,通过Trinity软件获得54,740条unigenes,通过Cufflinks软件获得38,181条unigenes。然后对所有的unigenes进行注释。本文为了探究线纹折麻蝇寄生后,东亚飞蝗在免疫与繁殖方面的基因表达差异,分别进行了葡聚微珠、藤黄微球菌、线纹折麻蝇处理4小时和6天的东亚飞蝗雌成虫的卵巢和脂肪体混合建库,进行数字表达谱测序,并做两次DGE测序重复。通过对这12个DGE的比较共获得61条序列,包含四个方面的内容:能量、异物识别、免疫和繁殖。能量相关基因是昆虫储存蛋白(Hexamerin like protein)。异物识别相关基因是革兰氏阴性菌表面识别蛋白(GNBP),革兰氏阳性菌表面识别蛋白(PGRP),凝集素(Lectin)和载脂蛋白3b(Apolipophorin 3b)。免疫相关基因是双翅杀菌肽(Lm diptericin),丝氨酸蛋白酶(Serine proteinase),磷酸丝氨酸蛋白磷酸酶(Phosphoserine phosphatase),丝氨酸蛋白酶抑制剂前体(Serpin precursor),丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin),酚氧化酶原(Pro phenoloxidase),酚氧化酶亚基(Phenoloxidase subunit A3),溶菌酶(Lysozyme),细胞色素P450(Cytochrome P450),toll类似蛋白(Tolloid like protein 2),toll蛋白(Protein toll),toll蛋白受体(Toll like receptor)。繁殖相关基因是保幼激素(Juvenile hormone),卵黄原蛋白(Vitellogenin)。并且比较了筛选得到的差异基因的表达值,用以预测差异基因的功能,发现藤黄微球菌在进入东亚飞蝗体内4小时,东亚飞蝗体内的杀菌作用便达到高峰期,但包囊反应在4小时还未有明显反应,要比杀菌作用慢。在东亚飞蝗遇到免疫挑战时,其会减少卵黄原蛋白基因的表达,使能量得到重新分配,卵黄原蛋白基因可作为繁殖能力的指示基因。
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