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目的:探讨在STAT3基因不同的结构域选择干涉靶点制备的siRNA对大鼠神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法:针对STAT3编码区的三个不同结构域SH2、CCD和TAD各分别选择一段序列,在体外构建短发夹结构,连到人U6启动子后,克隆到T载体中,构建重组体,再对重组质粒进行酶切鉴定,阳性的质粒DNA测序分析后再克隆到穿梭质粒PDC316中,通过Lipofectamine2000的介导和腺病毒包装质粒PBHG共转染至人胚肾HEK293细胞株中,经同源重组后获得重组腺病毒rAdUshSTAT3,应用PCR鉴定重组腺病毒,空斑传代纯化病毒并反复冻融扩增病毒,以50%组织培养感染剂量法(TCID50)测定病毒滴度。以阴性为对照,转染到大鼠神经胶质瘤(C6)细胞,MTT法检测C6细胞增殖情况,吖啶橙法检测C6细胞形态的改变,RT-PCR法和Western-blot法观察STAT3基因表达改变,用免疫组织化学卵白素-生物素-过氧化酶(ABC)检测C6细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:获得了带有U6启动子及STAT3反向互补靶序列的重组腺病毒载体rAdUshSTAT3(1-4),病毒滴度分别为108.6 TCID50/ml, 109.2 TCID50/ml,108 TCID50/ml, 108.4 TCID50/ml;未转导病毒的细胞相比,rAdSTAT3(1)、rAdSTAT3(2)和rAdSTAT3(3)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为20.16%、56.25%、73.18%; 19.76%、52.06%、70.2%;12.93%、49.59%、60.39%。rAdUshSTAT3(1)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了68.82% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了68% (p<0.005);rAdUshSTAT3(2)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了56.93% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了44% (p<0.01); rAdUshSTAT3(3)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了56.95% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了38%;与rAdSTAT3(4)相比,rAdSTAT3(1)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为18.76%、41.22%和62.35%;rAdSTAT3(2)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为18.34%、35.58%和58.16%;rAdSTAT3(3)对C6细胞增殖抑制率在24h、48h和72h分别为11.4%、31.7%和48.33%。rAdUshSTAT3(1)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了65.24% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了56.25% (p<0.01);rAdUshSTAT3(2)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了51.98% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了37% (p<0.05); rAdUshSTAT3(3)转导的C6细胞的STAT3 mRNA相对表达量下降了50.95% (p<0.01),蛋白相对表达量下降了31% (p<0.05)。吖啶橙染色法结果显示rAdUshSTAT3(1-3)转染后的细胞数量明显减少,细胞质萎缩,细胞核相对较大,并且出现凋亡小体。尤其是rAdUshSTAT3(1)转染后最为明显。免疫组化法显示rAdUshSTAT3(1)转染C6细胞后的PCNA表达量明显低于rAdUshSTAT3(4)转染C6细胞后的PCNA表达量(P<0.05)结论:在SH2结构域上选择的干涉靶点上制备的SiRNA抑制神经胶质瘤细胞增殖的效果最强,在CCD和TAD结构域上选择的干涉靶点上制备的SiRNA抑制神经胶质瘤细胞增殖的效果虽然也很好,但弱于在SH2结构域上选择的干涉靶点制备的SiRNA,这为今后针对STAT3的RNA干涉的再深入研究奠定了坚实基础。