论文部分内容阅读
目的腺苷(adenosine,AD)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)是目前已知的睡眠-觉醒周期调节的神经体液因子,下丘脑视前正中核(median preoptic nucleus,MnPN)是下丘脑视前区重要的睡眠调节脑区。本研究采用脑立体定位、核团插管、微透析、微量注射、多导睡眠描计等方法研究MnPN区AD和5-HT对大鼠睡眠-觉醒周期的影响。方法1.模型建立雄性成年SD大鼠,清洁级,体重280-320 g。戊巴比妥钠(40 mg/kg)经腹腔注射麻醉后,安装脑电和肌电电极用于多导睡眠描计,将微透析或微量注射用引导管插入大鼠MnPN区(AP:+0.24 mm、L/R:0.0 mm、H:7.8 mm)供核团内给药使用。插管与记录电极均以牙科水泥固定于颅骨上,并将引导脑电和肌电的电极通过导线连接到微型插座上。大鼠术后置于隔音室中恢复一周,记录前一天连接EEG/EMG导线,以予适应记录状态。2.动物分组动物随机分为四组:人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)组,AD组,硝基苯硫嘌呤核苷[S-(4-nitrobenzyl)-6-thioinosine,NBTI]组,5-HTP(5-hydroxytryptophan)组。3.微透析灌注给药术后1周,将微透析探针置入引导管内,放置探针1天后开始灌注给药。给药前2 h预灌注人工脑脊液,给药时间为21:00~23:00。ACSF组预灌注ACSF,AD组预灌注300μmol/L的AD,NBTI组预灌注20μmol/L的NBTI,灌流速度为2μl/min。4.药物微量注射通过引导管向MnPN内注射5-HTP(5-HTP组)或ACSF(对照组),1 min内注射完毕,留针1 min以防药液溢出。实验正式开始前伪注射(仅模拟注射操作)两天。给药时间为08:50-09:00。5.多导睡眠描计及数据分析每次描记均从07∶00开始,连续记录24 h。以10 s为一分段时间,将睡眠—觉醒周期分为3期:(1)觉醒期(W):以低幅快波脑电和明显的肌电活动为特征;(2)非快速眼动睡眠期(NREM):以睡眠梭形波和高幅δ波为特征,肌电活动明显减少;(3)快速眼动睡眠期(REM):以低幅快波为特征,除偶尔有肌肉抽动外,无明显肌电活动。总睡眠时间(TST)为NREM和REM之和。6.组织学鉴定实验结束后,通过引导管向MnPN区插入单极不锈钢电极。通过电极向微透析或微量注射位点通以2.5 mA直流电10 s,行阳极毁损,判断探针轨迹底部是否位于MnPN区,仅对定位准确的大鼠实验数据进行统计。7.统计学分析采用SPSS 12.0软件进行统计分析,数据以(x|ˉ)±S表示,两样本比较采用t检验,P < 0.05为差异有统计学意义。结果1. MnPN区微透析灌注AD和NBTI能明显增加大鼠NREM睡眠时间,减少觉醒时间。2.灌注AD后睡眠时间在第二、三小时增加,灌注NBTI之后睡眠时间在第三、四小时增加。3. MnPN区微量注射5-HTP能明显增加觉醒时间,减少NREM睡眠时间。结论1.腺苷是一种生理性睡眠调节因子,MnPN区腺苷具有促进睡眠的作用,其作用可能是通过其A2A受体介导的。2. MnPN区给予NBTI可以通过升高细胞外腺苷浓度发挥促睡眠效应。3. 5-HT参与睡眠-觉醒周期的调节,MnPN区5-HT具有促觉醒的作用,其作用可能通过其5-HT1B受体介导。