【摘 要】
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尽管现在有多种多样的蛋白表达系统可供选择,但是重组蛋白在大肠杆菌中的可溶表达仍然是困扰大家的一个难题,所以我们需要针对难以可溶表达的蛋白建立一种好的表达系统。随着对大肠杆菌中蛋白质折叠机制的深入研究,目前已经找到了一些提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法。其中,融合表达策略是最常用的方法之一。 在本论文中,我们进行了一种人SUMO融合表达系统在促蛋白可溶性方面的研究。通过利用两种不同的
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尽管现在有多种多样的蛋白表达系统可供选择,但是重组蛋白在大肠杆菌中的可溶表达仍然是困扰大家的一个难题,所以我们需要针对难以可溶表达的蛋白建立一种好的表达系统。随着对大肠杆菌中蛋白质折叠机制的深入研究,目前已经找到了一些提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法。其中,融合表达策略是最常用的方法之一。 在本论文中,我们进行了一种人SUMO融合表达系统在促蛋白可溶性方面的研究。通过利用两种不同的靶蛋白,分别为具有不溶性倾向的基质金属蛋白酶13（MMP-13）和具有中度可溶性的绿色荧光蛋白（GFP）。绿色荧光蛋白（GFP）是一种被广泛使用的体内表达报告基因,并且公认为在大肠杆菌中表达时具有部分可溶性,通过构建带有融合标签的载体提高靶蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的情况的鉴定,发现人SUMO是一种非常有效的蛋白可溶性标签。对SUMO化酶SENP2进行克隆表达纯化,对融合表达系统所表达的融合蛋白进行了纯化,并对所构建的融合蛋白进行了特异性的切割。获得了高度均一的、有活性的靶蛋白。当传统的技术不能获得有效的表达可溶蛋白的时候,实验室所构建的pHSE1、pHSE2可溶表达系统和去类泛素化酶联合使用将会取得一定的效果。
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