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兔球虫病是由艾美耳科的多种球虫所引起的一种原虫性疾病，对我国养兔业危害较重。本研究对兰州地区兔球虫种类进行了调查；应用无球虫兔和单卵囊分离技术对斯氏艾美耳球虫(E．stiedai)进行了分离、鉴定和致病性研究；构建了E．stiedai子孢子cDNA文库：应用噬菌斑原位杂交技术从cDNA文库中筛选微线蛋白5(Es MIC-5)基因片段；在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达MIC-5基因，研究了重组蛋白的免疫原性。通过上述研究主要得到以下结论：1．兰州地区存在14种兔艾美耳球虫，其中优势虫种为穿孔艾美耳球虫(21.2％)、无残艾美耳球虫(10.0％)和斯氏艾美耳球虫(9.0％)。1～3月龄的幼兔感染率达100％，表明兔球虫感染十分普遍。分离的E．stiedai兰州株具有较强的致病性。2．构建的E．stiedai子孢子cDNA文库中含有约6.2×10~5的重组子，重组率为94.9％，插入cDNA长度为500～1500bp。3．从构建的E．stiedai子孢子cDNA文库中筛选出2个阳性克隆，并从该克隆中分离到大小为1095 bp的cDNA片段。序列分析显示，该基因片段与E．tenella MIC-5基因3’端核苷酸同源性为89.1％，含有903bp的编码区、174bp的3’UTR区和17bp的poly(A)尾结构。在推导的氨基酸序列中，存在4个Apple结构域。4．在大肠杆菌中实现了Es MIC-5蛋白基因的表达，并用Ni离子柱纯化了重组蛋白。5．成功扩增兔IFN-γ基因，并构建了真核表达质粒pVAXIFN-γ。通过脂质体转染BHK细胞后，证实该真核表达质粒能正确表达IFN-γ。6．实现了Es MIC-5基因在毕赤酵母中的分泌性表达。通过免疫小鼠证实，该重组蛋白具有一定的免疫原性。7．对20只无球虫兔的免疫试验证实，毕赤酵母表达的重组蛋白MIC-5在pVAXIFN-γ的介导下肌肉注射免疫能有效地诱导机体产生较高水平的细胞免疫和体液免疫应答，并产生一定的免疫保护作用。