斑节对虾抗WSSV家系筛选

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自1993年对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrom Virus, WSSV)爆发以来,我国对虾养殖业曾遭受重创,但随着WSSV流行病学和控制技术的研究、养殖技术和模式的改进,我国对虾养殖的产量和规模逐渐得到恢复和发展,目前对虾养殖产量每年可达到130多万t以上,但目前WSSV仍严重威胁着我国对虾养殖业的发展。培育在一定程度上抗WSSV的对虾新品种是解决我国对虾养殖业目前困境的有效途径之一。WSSV宿主极其广泛,对虾在养殖过程中普遍存在WSSV潜伏感染,携带少量病毒的对虾可以在良好的环境下继续生存而不暴发白斑综合征。由于此前在斑节对虾抗WSSV家系筛选时仅仅从定性的角度分析了对虾的死亡规律,而没有从定量的角度来选定合适的筛选浓度以及分析对虾肌肉内病毒含量的变化。本研究利用3种浓度WSSV粗提液(3×103、6×102、2×102copies/mL)和PBS液注射感染病毒携带量约1×105copies/g的斑节对虾,研究了斑节对虾的死亡规律、肌肉内病毒含量的变化、总血淋巴细胞数及不同血淋巴细胞的比例变化、5种免疫酶(ACP、AKP、PO、POD、SOD)活性的变化,建立了斑节对虾抗WSSV家系筛选的方法,并初步应用于37个斑节对虾家系的抗病筛选,选出了5个生长速度、抗病能力相对较强的家系。主要研究结果如下:1.3种浓度WSSV感染下,斑节对虾累积死亡率分别为(93.33±2.89)%、(56.67±5.77)%和(45.00±5.00)%,对虾肌肉内病毒含量均在48h达到最大值,濒死对虾肌肉内病毒含量均达到1010copies/g数量级。从对虾死亡规律及体内病毒含量来看,实验所用对虾WSSV毒力较先前报道没有变化;极少量的WSSV引起了潜伏感染WSSV的对虾暴发性死亡。对照组没有出现死亡,表明潜伏感染WSSV的对虾在没有外来病原刺激的情况下未发病死亡。2.3种浓度WSSV感染下,除个别时间点外,对虾总血淋巴细胞数的变化规律与肌肉中WSSV的扩增规律成负相关;半颗粒细胞所占比例最大,且初期呈现显著上升的趋势,后期比例虽有起伏但均维持在较高水平;颗粒细胞与透明细胞比例初期均显著下降,后期颗粒细胞比例显著低于初期,而透明细胞比例则与初期无显著性差异。3.3种浓度WSSV感染下,ACP、AKP、SOD活性总体呈现先上升后下降随后上升的趋势,其中SOD活性后期显著高于初期水平;PO、POD活性总体呈现先下降后上升随后下降、最后上升的趋势,但PO后期活性水平与初期相当,而POD后期活性水平显著高于初期。各免疫相关酶的反应强度与WSSV的感染浓度存在一定关系,除ACP外其余4种酶的活性变化均以6×102copies/mL浓度组最为敏感。PBS组5种免疫酶活性变化幅度均显著小于3种WSSV浓度感染组。4.采用25copies/g对虾体重的WSSV注射液感染37个斑节对虾家系,除两个家系成活率在50%左右外,有17个家系成活率接近100%,另有18个家系成活率几乎为0;根据抗病评价体系Ki=(∑Ai×Mi+1×F)/N将37个家系分为强抗病家系组和弱抗病家系组;通过对所有家系平均体重、抗病评价指数及两指标加权系数等综合分析,Y125*T115、S186、Y126*Y175、 T179*S132、F20*S198五个家系生长速度及抗病性能相对较强。实验结果表明,低剂量WSSV感染可以筛选到具有一定抗病性的对虾,即本研究建立的筛选方法可以应用于斑节对虾抗WSSV家系筛选中来。
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