Sulfiredoxin基因敲低对HeLa细胞恶性生物学行为的影响

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目的:探讨干扰Sulfiredoxin(Srx)基因表达对宫颈癌HeLa细胞恶性生物行为学的影响。方法:本实验选取宫颈癌HeLa细胞株,分为Wild-Type(WT)组,Non-Target(NT)组, Knock-Down (KD)组。利用siRNA技术干扰Srx在 HeLa细胞中的内源性表达,利用Real-Time PCR及Westernbolt鉴定干扰效果。首先,利用DCFH-DA标记的荧光探针测定干扰Srx表达后对HeLa细胞内ROS水平的影响,而后分别采用MTT法、平板克隆形成实验、transwell实验及流式细胞术分别检测三个不同处理组HeLa细胞增殖力,体外成瘤能力,浸润、迁移能力,细胞周期及凋亡率。最后采用小管形成实验及血管拟态实验观察干扰Srx后对内皮细胞血管形成能力的影响。结果:与两对照组比较,KD组HeLa细胞Srx表达在mRNA和蛋白质水平均显著被抑制。KD组细胞内ROS水平及凋亡率显著增加(P<0.05),细胞增殖力,体外成瘤能力,浸润、迁移力及血管拟态形成能力都明显受到抑制(P<0.05),且KD组细胞的细胞周期被阻滞于G1期。KD组细胞上清培养基使内皮细胞EA.hy926细胞体外血管形成能力也明显被抑制(P<0.05),以上实验结果在两对照组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:实验结果表明Srx对HeLa细胞多种恶性生物学行为具有促进作用,说明其与宫颈癌发生及进展有密切关系。
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