定向诱导的骨髓间充质干细胞对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的实验研究

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目的:探讨定向诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响及其适宜移植时间。方法:1)采用贴壁法培养、纯化BMSCs:取第3代的BMSCs加入含bFGF、EGF及B27的无血清复合神经诱导液进行诱导,采用免疫细胞化学法以nestin鉴定神经干细胞,加入血清培养后,以NF200GFAP鉴定分化的神经元样、星形胶质细胞样细胞。细胞移植前3天以5澳2脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记诱导后的BMSCs;2)采用Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,45只脊髓损伤模型大鼠随机分为3组,每组15只,A、B两组分别在模型制作后1周、2周两个时间点从原损伤部位移植Brdu标记的诱导后的BMSCs, C组为对照组,从原损伤部位注入同等量的生理盐水。细胞移植后各组大鼠进行运动功能BBB评分来判断神经功能恢复情况,并应用荧光免疫化学染色检测移植细胞的存活、分化情况(Brdu与NF-200双标记)及损伤部位神经纤维的再生情况。HE染色观察脊髓损伤区空洞的大小。结果:1)在体外扩增培养的BMSCs,增殖速度快,扩增能力强:第三代的BMSCs形态均一,呈单层生长,胞体多为长梭形,呈漩涡状排列,在含bFGFEGF及B27的无血清复合神经诱导液中能分化为神经干细胞,加入血清后能进一步分化为神经元样细胞及星形胶质细胞样细胞,相应表达神经元、星形胶质细胞的标记物NF200及GFAP;2) SCI细胞移植术后1~6周,A、B、C三组动物后肢神经运动功能均有不同程度的恢复,A、B两组的BBB评分均显著高于C组(P<0.05)。A、B两组免疫荧光显示,有大量Brdu和Nestin双标阳性细胞及部分Brdu和NF200双标阳性细胞充填于脊髓损伤区,并与宿主损害部近、远端密切相接,同时见明显的神经纤维再生,脊髓空洞面积明显小于C组(P<0.05)。在A组上述改变更加显著。结论:本实验中定向诱导的骨髓间充质干细胞具有神经干细胞的生物学功能,且具有进一步分化能力;移植定向诱导的BMSCs可有效促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,其中,一周后移植效果优于两周后移植。
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