【摘 要】
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采用PCR方法克隆恶性疟原虫裂殖子表面抗原2(MSA2)基因;将MSA2基因单独或与乙型肝炎病毒前S2基因联合插入真核表达质粒;质粒体外转染COS-7细胞,采用Western blot等方法检测
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采用PCR方法克隆恶性疟原虫裂殖子表面抗原2(MSA2)基因;将MSA2基因单独或与乙型肝炎病毒前S2基因联合插入真核表达质粒;质粒体外转染COS-7细胞,采用Western blot等方法检测转染细胞表达产物,改良碱裂解、聚乙二醇纯化法实验室大量制备质粒作为DNA疫苗,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测鼠血清抗体,体外培养恶性疟原虫,观察免疫鼠血清体外对无性红细胞期恶性疟原虫的抑制作用.结果:从FCC-1/HN株恶性疟原虫基因组中克隆出807bp DNA序列,经酶切和序列测定证实为MSA2基因;分别构建得到4个真核表达质粒,酶切鉴定为含目的基因的重组质粒;其中3个质粒在COS-7细胞中表达出与理论分子量大小一致的产物;得以产量和纯度都比较高的质粒DNA,超螺旋结攀质粒占总质粒成分的90%以上;其中有4组质粒DNA免疫小鼠产生出特异抗体,含单一MSA2基因或前S2基因DNA免疫鼠血清抗体滴度最高,两个基因联合构建的DNA疫苗免疫鼠,同时产生同两种特异抗体,但滴度均较低;各组质粒DNA免疫小鼠血清体外对恶性疟原虫均显示出抑制作用,含单一MSA2基因组作用最强,抑制率达91.4%.结论:DNA疫苗技术可用于恶性疟原虫无性红细胞期疫苗研究;MSA2基因可作为恶性疟 原虫无性红细胞期DNA疫苗的保护性抗原基因;乙型肝炎病毒前S2基因没有增强MSA2基因免疫原性作用.
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