【摘 要】
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该研究将含有突变型beta-catenin基因的质粒导入小鼠永生化肝细胞系AML12细胞中,建立能稳定表达beta-catenin蛋白的细胞系AML12S33Y.用含有Tcf DNA结合位点的荧光素酶报告基
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该研究将含有突变型beta-catenin基因的质粒导入小鼠永生化肝细胞系AML12细胞中,建立能稳定表达beta-catenin蛋白的细胞系AML12S33Y.用含有Tcf DNA结合位点的荧光素酶报告基因检测突变型beta-catenin基因的在细胞内的功能.用流式细胞仪和细胞计数方法比较这两种细胞的增殖能力.观察它们在软琼脂中生长以及注射到严重复合免疫缺陷鼠(SCID)后的成瘤性.以Annexin V方法用流式细胞仪检测它们对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)alpha和放射菌素D诱导其凋亡的耐受性.并通过把beta-catenin基因修饰的肝细胞移植到同种异基因小鼠脾脏内,用PCR和免疫组织化学方法观察肝细胞在受体肝脏内的成活和增殖情况,从而为促进移植的肝细胞在受体肝脏内的存活和增殖提供新的思路和理论依据.该试验包括以下三个部分.通过该实验以上三个部分的研究可以认为,突变型beta-catenin可以激活beta-catenin/Tcf转录功能,由此导致鼠肝细胞c-myc 和cyclin D1基因激活,从而抑制鼠肝细胞凋亡,促进肝细胞在体外以及移植后在受体肝脏内增殖.同时研究表明,转染突变型beta-catenin并不能使肝细胞形成肿瘤.因此,突变型beta-catenin基因转染有望解决肝细胞移植中细胞增殖困难的问题,为推动肝细胞移植临床应用奠定基因.
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