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急性肾衰竭(acute renal failure,ARF)是临床常见的危重症，其死亡率一直居高不下，甚至有报道高达80％。氧化应激损伤肾小管上皮细胞在ARF缺血再灌注过程中有重要的病因学意义。氧化应激损伤涉及到氧化应激与抗氧化系统的失衡，因此可以通过给予抗氧化剂限制氧化损伤。姜黄素(curcumin,Cur)是从姜黄中提取的酚性色素，为姜黄的主要有效成分，体内外实验证明它具有抗氧化作用。Bcl-2蛋白是重要的抗凋亡蛋白，有研究表明Cur可以通过上调表达Bcl-2蛋白的表达抑制氧化应激导致PC12细胞的凋亡，但Cur可否通过抗氧化作用而对H2O2诱导的肾小管上皮细胞损伤具有保护作用尚未见报导。NRK52E是大鼠近端。肾小管上皮细胞，本研究以H2O2损伤NRK52E细胞为模型探讨姜黄素(curcumin,Cur)在ARF缺血再灌注过程中对氧化应激损伤肾小管上皮细胞的保护作用及其机制。
第一部分 H2O2诱导NRK52E细胞凋亡
一、目的：探讨H2O2是否诱导NRK52E细胞的凋亡
二、方法：
1.正常培养NRK52E细胞，取对数生长期细胞以不同浓度(100，300，500μmol/L)H2O2刺激24小时，碘化丙啶(Propidium iodide，PI)染色流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测细胞凋亡，Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学变化。
2.统计学分析计量资料用均数±标准差表示，组间差异比较用单因素方差分析(one-way ANOVA)，以P<0.05为有统计学意义的标准。所有数据均用SPSS 13.0统计学软件处理。
三、结果：
1.FCM结果显示：NRK52E细胞经H2O2刺激24小时后凋亡明显增加。1OOμmol/L组为(5.53+4.0)％(P>0.05)，300μmol/L组为(32.32±13.4)％(P<0.05)，500μmol/L组为(62.834±7.5)％(P<0.05)。对照组为(2.67+0.8)％。H2O2培养24小时，与对照组相比，NRK52E细胞凋亡明显增加，呈剂量依赖模式。
2.Hoechst33258染色结果显示：正常NRK52E细胞染色质呈均质状，为弥漫均匀的低强度荧光，细胞膜完整，100、300、500μmol/L H2O2处理24小时后，细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡NRK52E细胞逐渐增多。
四、小结：
H2O2能诱导NRK52E细胞的凋亡，并且呈剂量依赖关系。
第二部分姜黄素在H2O2损伤NRK52E细胞中的保护作用
一、目的：探讨姜黄素对H2O2损伤NRK52E细胞的保护作用及其机制。
二、方法：
1.正常培养NRK52E细胞，取对数生长期细胞做实验。实验分组：①正常对照组，②H2O2(500μmol/L)组，③姜黄素组(20μmol/L)，④姜黄素组(40μmol/L)，⑤20μmol/L姜黄素+H2O2组，⑥40μmol/L姜黄素+H2O2组，细胞培养24小时，碘化丙啶(Propidium iodide，PI)染色流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡，Hoechst33258染色观察细胞凋亡的形态学变化，Western blot检测细胞Bcl-2蛋白的表达。
2.统计学分析同第一部分
三、结果：
1.Cur对NRK52E细胞的凋亡无明显影响。20μmol/L Cur组凋亡率为(2.93±0.9)％(P>O．05)，40μmol/L Cur组凋亡率为(3.10±1.4)％(P>0.05)，对照组为(2.83±0.5)％。
2.姜黄素可明显抑制500μmol/L H2O2作用24小时后对NRK52E细胞的凋亡诱导作用。500μmol/L H2O2作用24小时后细胞凋亡率为(72.70±26.7)％，合用20pmol/LCur细胞凋亡率下降为(32.95±15.9)％(P<0.05)，合用40μmol/L Cur细胞凋亡率下降为(22.23+13.6)％(P<0.05)。
3.Hoechst33258染色结果显示：正常NRK52E细胞染色质呈均质状，为弥漫均匀的低强度荧光，细胞膜完整。500μmol/L H2O2组细胞核呈浓染致密的固缩形态或颗粒状荧光的凋亡NRK52E细胞增多，分别合用20、40μmol/L curcurnin后，呈凋亡改变的细胞比500μmol/L H2O2组明显减少。
4.Western blot结果显示，500μmol/L作用24小时后，Bcl-2表达明显下降，合用40μmol/L姜黄素后Bcl-2表达明显增强，单用40μmol/L姜黄素，Bcl-2表达水平进一步上调。
四、小结：
姜黄素可明显抑制H2O2诱导NRK52E细胞的凋亡。
姜黄素可上调表达Bcl-2蛋白的表达。
总结
1.H2O2能诱导NRK52E细胞的凋亡，并且呈剂量依赖关系。
2.姜黄素可明显抑制H2O2诱导NRK52E细胞的凋亡。