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【目的】构建人乳头瘤病毒HPV16型、18型E6E7融合蛋白的原核表达载体pET28a-HPV16-E6E7、pET28a-HPV18-E6E7,在大肠杆菌E.coli中对其进行原核表达、纯化及理化性质的检测,为HPV的体外检测试剂的制备和HPV治疗性疫苗的研制提供可能的基础。【方法】1.参照Genbank上公布的HPV16、18型的基因信息N001526.4（HPV16）与NC001357.1（HPV18）,设计模板时,去除E6基因的终止密码子TAA,在E6和E7基因片段之间插入柔性氨基酸（Gly4Ser）3连接E6、E7;2.根据HPV16、18型E6、E7的基因信息,设计带有酶切位点（BamH Ⅰ/Xho Ⅰ）和保护性碱基的引物,E6、E7基因片段之间的引物包括柔性氨基酸的序列;3.以筛选HPV16、18阳性基因组为模板,在Taq酶作用下,PCR扩增出HPVl6型、18型E6、E7片段;再以扩增好的E6、E7片段为模板,扩增出HPVl6型、18型E6E7融合片段,回收E6E7融合基因片段;4.通过连接、转化实验,将E6E7融合基因插入载体质粒pET28a,构建重组质粒pET28a-HPV16-E6E7,pET28a-HPV18-E6E7。用菌落PCR、琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶双酶切鉴定、核酸序列比对等方法,对重组质粒DNA进行鉴定;5.将测序正确的重组质粒pET28a-HPV16-E6E7,pET28a-HPV18-E6E7转化至大肠杆菌BL21,28℃、IPTG 0.5 mmol/L进行诱导表达;6.用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、蛋白质印迹法（Western blot,WB）分析鉴定融合蛋白的分子量和纯度;7.使用镍柱（NiNTA）亲和层析法对融合蛋白HPV16-E6E7、HPV18-E6E7进行纯化;8.用BCA法计算融合蛋白的浓度。【结果】1.成功获得HPV16型、18型E6、E7基因片段及HPV16型、18型E6E7融合基因片段;2.成功构建原核表达质粒pET28a-HPV16-E6E7、pET28a-HPV18-E6E7。经（BamH Ⅰ/Xho Ⅰ）双酶切鉴定和核酸测序比对,证实重组质粒pET28a-HPV16-E6E7、pET28a-HPV18-E6E7中插入的E6E7融合基因片段,方向、大小、插入位点及阅读框架均正确;3.在28℃,0.5 mmol/L IPTG条件下,融合蛋白HPV16-E6E7、HPV18-E6E7,得到较高效表达;4.经SDS-PAGE分析融合蛋白的理化性质,带有6个His标签的融合蛋白HPV16-E6E7、HPV18-E6E7表观分子量大小约37 KD和39 KD,与预期相符;5.经Western blot鉴定显示,融合蛋白HPV16-E6E7、HPV18-E6E7对His标签有良好的免疫原性,初步证实融合蛋白可能为目的蛋白;6.经镍柱亲和层析,对两个融合蛋白进行纯化,得到纯化后的目的蛋白;7.经BCA法测定,融合蛋白HPV16-E6E7的浓度为2.15 mg/mL,融合蛋白HPV18-E6E7的浓度为1.30 mg/mL。【结论】成功构建原核表达质粒pET28a-HPV16-E6E7、pET28a-HPV18-E6E7,融合蛋白HPV16-E6E7、HPV18-E6E7得到高效的表达;得到纯化后的HPV16-E6E7、HPV18-E6E7目的蛋白,为进一步开发HPV体外检测试剂和HPV治疗性疫苗的研制奠定了基础。