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研究背景:经济的快速发展、生活方式以及饮食习惯的改变使得心血管疾病的危险因素水平持续升高,稳定性心绞痛作为常见的心血管疾病通常在活动或者精神紧张时发生,是由心肌供氧不足或者心肌缺血引起,与心肌梗死密切相关,发病率较高,社会经济负担大。稳定性心绞痛中医诊断为“胸痹”,血瘀证是其较为主要的证型,历代医家通过活血化瘀药物治疗胸痹积累了大量的实用经验,现代中药复方丹红注射液在心绞痛血瘀证的治疗过程中具有较高的安全性及有效性,因此探索其机制具有重要意义。随着高通量测序技术以及生物信息学技术的发展,中医证候及复方药理的研究已经进入转录组学层面,通过利用转录大数据、深层次、多指标、网络关联性强的特点,能够深入挖掘丹红注射液治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证的机制。研究目的:（1）筛选丹红注射液治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证病证疗效相关模块;（2）建立丹红注射液治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证相关的ceRNA调控网络;（3）探索丹红注射液不同时间点治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证在病证疗效相关模块及ceRNA网络层面分子机制的变化。研究方法:采用加权基因共表达网络分析方法构建丹红注射液治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证患者的全RNA组学（lncRNA、miRNA、mRNA）第14天、30天的共表达网络,识别差异表达模块,计算差异模块与患者西雅图心绞痛量表心绞痛发作频率积分以及血瘀证证候积分的皮尔逊相关系数,以相关系数大于0.25且P＜0.05为筛选条件,识别2个时间点的病证疗效相关模块。使用Metascape数据库及Starbase数据库对2个时间点的病证疗效相关模块进行功能富集分析,比较2个时间点模块中相关基因的通路和功能。利用LncBase Predicted数据库预测lncRNA与miRNA之间的相关关系;Targetscan、miRDB、miRTarBase、miRcode数据库预测miRNA与mRNA之间的相关关系,构建ceRNA 网络,对网络进行拓扑分析挖掘核心节点,并对网络中的调控关系进行探索,分析丹红注射液治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证动态变化的分子机制。使用miEAA数据库、LncSEA 数据库、Metascape 数据库、Starbase 数据库分析 ceRNA 网络中 lncRNA、miRNA、mRNA在2个时点的功能,并进行比较。研究结果:1.第14天lncRNA有56个模块为差异模块,14456个差异lncRNA;miRNA有29个差异模块,364个差异miRNA;mRNA有43个差异模块,2208个差异miRNA。第14 天病证疗效相关模块为 lncRNA paleturquoise 模块、miRNA midnightblue 模块、mRNA darkred模块,包括14个miRNA,35个mRNA,83个lncRNA。通过在线数据库分析病证疗效相关模块中基因的互作关系,并构建第14天ceRNA网络,网络中有13个miRNA、11个mRNA、7个lncRNA存在相互作用关系,共有38条边。2.第30天lncRNA有67个模块为差异模块,14467个差异lncRNA;miRNA有26个差异模块,297个差异miRNA;mRNA有79个差异模块,1895个差异miRNA。第30 天病证疗效相关模块为 lncRNA orange 模块、miRNA salmon 模块、mRNA darkturquoise模块,包括16个miRNA,46个mRNA,85个lncRNA,通过在线数据库分析病证疗效相关模块中基因的互作关系,并构建第30天ceRNA网络,网络中有7个miRNA、13个mRNA、2个lncRNA存在相互作用关系,共有23条边。3.使用miEAA数据库、LncSEA数据库对2个时间点的miRNA、lncRNA进行富集,并未富集到通路。使用Metascape数据库及Starbase数据库分析发现第14天时GO富集中涉及104个生物过程,如乳腺导管形态发生、表皮生长因子激活受体活性的正调节、组蛋白调节、甘油三酯转运、凝血调节等过程;32种细胞组分,与核RNA输出因子复合物、血小板颗粒、脂蛋白颗粒等有关;31种分子功能,与表皮生长因子受体结合、透明质酸氨基葡萄糖苷酶活性、己糖胺酶活性、脂蛋白脂肪酶活化剂活性等相关。KEGG通路富集分析显示共富集到55条通路,涉及Erbb信号通路、Ppar信号通路、药物代谢细胞色素P450通路、谷胱甘肽代谢通路、涉及Wnt信号通路、P53信号通路、TGFβ信号通路、MAPK信号通路、Jak Stat信号通路、Mtor信号通路等。第30天病证疗效相关模块GO富集分析显示共涉及117个生物过程,如SRP依赖性共翻译蛋白靶向膜信号序列识别、蛋白质靶向、有丝分裂细胞周期转换的调控、神经冲动传导、神经递质调节等;17种细胞组分,如施万细胞微绒毛、滑面内质网、丝状肌动蛋白等;43个分子功能,如钾通道活性、阳离子通道活性、类固醇激素受体活性、胆固醇脱氢酶活性等。KEGG共富集到52条通路,涉及Wnt信号通路、Erbb信号通路、MAPK信号通路、Gnrh信号通路、KEGG P53信号通路、Tgf Beta信号通路、类固醇生物合成、糖酵解糖异生、病毒性心肌炎、丙酮酸代谢、胰岛素信号通路、细胞凋亡等信号通路。4.第14天网络与第30天网络具有相同的网络直径,说明两个网络应对内外干扰因素的能力相同。2个时间点的网络特征路径长度、平均度中心性、网络密度、网络异质性差别较小,第30天网络的连通子图较低,网络连接性可能更强。通过网络的介数中心性值发现14天网络中关键节点为hsa-miR-516b-5p,其介数中心性值为0.40;30天网络中关键节点为hsa-miR-6796-3p,其介数中心性值为0.51。根据关键节点推断第14天网络中 ENST00000549163.1—hsa-miR-516b-5p—CSMD2/GABRA3/MARK1/SCN1A/SLC44A5、第 30 天网络中 ENST00000434195.1—hsa-miR-6796-3p—ACSM5/GALR1/NFASC/ST8SIA5可能存在调控关系,对网络产生较为关键的影响,通过分析验证发现hsa-miR-6796-3p-NFASC存在共同作用的通路,可能具有调控关系。结论:1.通过加权基因共表达网络分析方法分别确定了丹红注射液治疗慢性稳定性心绞痛血瘀证第14天、第30天2个时间点的病证疗效相关模块,并基于互作关系构建ceRNA网络。2.第14天病证疗效相关模块与第30天病证疗效相关模块均作用于Erbb通路、Wnt通路、P53通路、TGF β通路、MAPK通路、胰岛素信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、B细胞受体信号通路,第14天模块中单独具有药物代谢细胞色素P450信号通路,第30天模块中富集到的糖脂代谢相关通路较多。第14天及第30天ceRNA网络中关键节点分别是hsa-miR-516b-5p,（介数中心性值0.40）、hsa-miR-6796-3p（介数中心性值0.51）,网络中可能具有潜在的调控关系。3.研究发现心绞痛病理因素、血瘀证表现、丹红注射液治疗机制与病证疗效相关模块分析及ceRNA网络中节点均涉及Erbb通路、Wnt通路、P53通路、TGF β通路、MAPK通路、胰岛素信号通路等,研究提示了一种挖掘中药复方治疗疾病机制的思路。