猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种病毒性传染病,它的传播给全球养猪业带来的经济损失是不可估量的。如何有效的预防和治疗该病是各国研究的热点,比较有效的检测方法包括RT-PCR、ELISA检测等,ELISA检测快速、有效的优点使其能够广泛的应用。接种灭活疫苗是我国预防该病的主要方法,但是单一的结构蛋白或单一的非结构蛋白的ELISA检测不能够判断抗体的产生是由灭活疫苗引起还是感染野毒引起的,这就会影响该病的检测结果,如何建立更加准确、有效的ELISA检测方法是目前的当务之急。GP5蛋白是检测PRRSV抗体的主要靶蛋白,Nsp7基因在非结构蛋白中相对保守,不同毒株之间差异较小,它的这个特点可以使其在检测不同毒株刺激机体产生的抗体时保持较高的特异性。接种灭活疫苗和感染PRRSV都可以刺激机体产生针对结构蛋白的抗体,所以只用结构蛋白作检测抗原会影响检测结果的准确性。本研究在单一结构蛋白ELISA检测的基础上增加一种非结构蛋白以达到能准确判断抗体来源的ELISA检测方法,利用PCR技术,从PRRSV分离株中扩增出GP5和Nsp7基因,将目的基因与表达载体pET28a连接,将构建的重组表达载体pET28a-GP5、pET28a-Nsp7转化到表达菌株BL21(DE3)中,测序鉴定。经IPTG诱导表达,表达产物再进行SDS-PAGE分析。结果表明成功表达了GP5蛋白和Nsp7蛋白,表达蛋白经His Trap FF纯化柱纯化,然后进行Western blot分析,证明表达的重组蛋白均具有良好的抗原性。优化ELISA检测的各种条件,成功建立GP5-Nsp7-ELISA检测方法。