猪流感(Swine influenza, SI)是由A型流感病毒引起的一种猪的急性呼吸道传染病,一年四季均可发生,各种日龄的猪都可感染。目前对猪流感尚无有效的治疗手段,临床上主要通过疫苗接种预防该病。SI的商品化灭活疫苗主要是H1NI型和H3N2亚型单价或双价全病毒灭活疫苗。但由于近年来重组毒株频繁出现,以传统流行株为毒种的灭活疫苗已无法提供理想的保护作用,因此人们开始对SIV进行新型疫苗研究,以应对其高度变异的特性。本研究选择SIV主要结构蛋白的T、B细胞抗原表位片段,将多个表位片段串联,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,命名为pET-30a-EP1。经测序鉴定阅读框正确后,转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG诱导,目的片段获得成功表达。SDS-PAGE电泳,表达重组蛋白为27KD,与预期大小相相符。免疫转印试验显示,重组蛋白可以与His-tag抗体发生免疫学反应,表明表达重组蛋白为构建的目的蛋白,命名EP1。经BCA蛋白定量试剂盒分析,蛋白浓度为1306.88μg/mL。本室采用不同的表位抗原基因串联表达,获得了第二种表位抗原蛋白,命名EP2。纯化的EP1蛋白、EP2蛋白分别采用皮下和滴鼻方式免疫6周龄KM小鼠。间接ELISA检测小鼠血清IgG抗体、鼻液IgA抗体水平。结果,EP1蛋白免疫小鼠的血清IgG、局部粘膜IgA抗体水平均高于PBS对照组,EP2蛋白皮下免疫组血清IgG、滴鼻免疫组局部粘膜IgA抗体水平高于PBS对照组,但滴鼻免疫组血清IgG抗体较低。MTT法分析小鼠脾脏T淋巴细胞增殖反应。结果,EP1、EP2蛋白免疫组T淋巴细胞对免疫原刺激反应明显高于PBS组。HI试验检测SIV血凝抗体,皮下注射组抗SIV H1N1亚型病毒效价均达1：128以上,EP1滴鼻组的HI效价1：64；但EP2蛋白滴鼻免的HI效价只有1：4。结果表明,所构建的融合蛋白获得很好的表达,EP1重组蛋白无论以何种途径免疫小鼠,均可诱导小鼠产生较好的体液免疫反应和细胞免疫反应,其中滴鼻免疫还获得了理想的局部免疫分泌型IgA抗体,为阻止病毒由黏膜途径感染提供了有力的保护屏障。