三株植物内生菌的分离、鉴定及代谢产物初探

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作为微生物资源重要组成部分的内生菌,其所蕴藏的用途与价值是十分巨大的。其中,内生菌在药物研制与天然色素的开发方面所发挥的作用便不可小觑。本文通过一定的分离筛选方法,获取到两株具有一定抗菌活性和一株能产红色素的内生菌,并对三株内生菌进行了相应研究。本文以从南宁良凤江国家森林公园采集的20余种广西区内常见植物为研究对象,分别采集其根、茎、叶组织块进行内生菌的分离和纯化,最终分离得到59株内生细菌及145株内生真菌。对分离得到的内生菌的代谢产物进行抑菌实验发现,59株内生细菌中,有11株内生细菌至少对一种指示菌有拮抗活性,有6株内生细菌对两种指示菌有抑菌活性。有5株内生真菌的发酵上清液的甲醇粗提液至少对一种指示菌有抑菌作用。实验中发现,从杉木根部分离得到的内生细菌SM-8的发酵液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑制作用。从阴香茎部分离到得内生真菌Y-74的发酵液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌也表现出较大的抑菌活性。同时,在分离得到的内生真菌中获取到一株能产天然红色素的内生菌T-28,本文一并对其进行了研究。对杉木内生细菌SM-8的进行了鉴定以及培养条件优化,结果表明,该内生细菌为枯草芽孢杆菌,将其命名为Bacillus subtilis SM-8。并将其16SrDNA序列提交到GenBank,登录号为KC257097。其发酵产抑菌活性物质较高时的最佳碳源为蔗糖、最佳氮源为蛋白胨,最适pH值为6.0,能在pH值环境为4.5-9.0的环境下生长,最适温度为30℃,能在15℃-55℃温度范围内生长,并可耐受1%-5%的盐环境。对具一定抗菌活性的阴香内生真菌Y-74进行了培养特征,形态观察及分子鉴定,并对菌株Y-74发酵所产的次级代谢产物进行了分析。结果表明,该内生真菌为橘青霉,通过核苷酸同源性比较分析,菌株Y-74与橘青霉(Penicillium citrinum)JQ717340、JQ712839、FJ765031、GU565103等的同源性达到100%。对其发酵液中的代谢产物进行分离纯化,获得11个组分。经抑菌实验跟踪,发现其中的B、D及E,F组分均表现出一定的抑菌活性。对三组分进行了 GC-MS分析检测。同时,从组分B中分离得到一纯物质,但遗憾的是该物质并不表现出抗菌活性。同时,对产红色素菌株也做了相应的研究。首先对菌株T-28的生理生化特性进行了考察,并运用分子生物学手段对其进行分子鉴定。结果表明菌株T-28为砖红镰刀菌,并将其序列提交到GenBank,登录号为KC787693。对菌株T-28所产红色素的成分进行了分离提纯,以乙酸乙酯为洗脱剂,硅胶柱层析进行纯化。采用GC-MS对色素组分进行分析。分析显示,该红色素主要是由三种物质组成的混合物质,但由于表征数据的缺乏因而尚不清楚三种物质的具体结构。
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