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背景及目的食源性动物中产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumbeta-lactamases,ESBL)大肠埃希菌向周边环境中的传播已引起广泛关注,目前,已有研究大多集中在规模化养殖场用药情况以及产ESBL大肠埃希菌耐药特征及流行趋势方面。缺少对散养户,即家庭式饲养模式进行的研究。因此,本研究旨在调查农村家庭式猪养殖地区养殖废弃物及其周边环境中产ESBL大肠埃希菌的流行状况、药物敏感性和分子特征,同时探究养殖废弃物中产ESBL大肠埃希菌向周边不同环境中的传播情况,进而为今后控制该地区抗生素耐药及耐药菌的蔓延提供理论依据。方法-本研究于2015年7月19日-24 日开展,选取山东省Z市农村家庭式猪饲养地区的12个村,采集养猪废弃物(猪粪便、废水和排污口沉积物)及其周边环境样品(土壤及蔬菜、河水、河流沉积物和井水);通过ESBL筛选性培养基和飞行时间质谱仪对产ESBL大肠埃希菌进行筛选和鉴定;采用纸片法进行ESBL确认试验;参照美国CLSI2016和欧洲药敏折点标准,采用琼脂稀释法对菌株进行MIC测定;采用PCR方法检测blaCTX-M基因,并通过测序进行确认;应用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)和脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)的方法进行分了分型和同源性分析。结果1、养殖废弃物中共检出产ESBL大肠埃希菌45株,检出率为47.87%。其中,猪粪便中产ESBL大肠埃希菌检出率显著高于废水和排污kou 沉积物(P<0.001)。药敏结果显示,菌株的多重耐药率达100%,尤其对头孢噻肟(97.78%)、四环素(95.56%)、复方新诺明(86.67%)和氟苯尼考(80%)等抗菌药物耐药程度较高,但所有菌株对美罗培南和替加环素均不耐药。此外,共检出6种CTX-M基因型,主要以blaC-TX-M-65(12株)和blaCTX-M-14(11株)为主;同时,检测到27种ST型别,优势型别为ST10型及其复合体,占24.44%(11/45)。2、蔬菜中未检出产ESBL大肠埃希菌。土壤中共检出4株产ESBL大肠埃希菌,检出率为16.67%。药敏结果显示,菌株多重耐药率达100%,土壤中分离株与养殖废弃物中分离株耐药特征总体一致;所携带耐药基因均为CTX-M-9组中的blaCTX-M-65;经PFGE分析发现3株与养殖废弃物中分离株同源性>80%,具有亲缘关系。3、河水与河流沉积物中产ESBL大肠埃希菌检出率(河水:64%,河流沉积物:76.47%)高于井水(23.26%)(P<0.001)。药敏结果显示,河水与井水中产ESBL大肠埃希菌耐药情况与养殖废弃物的结果基本一致,并且多重耐药率达100%。水体环境中检出6种CTX-M基因型,以携带CTX-M-9组的blaCTX—M-14基因为主;PFGE酶切图谱显示大部分菌株表现出唯一的酶切图谱,无亲缘关系。同时,河水和井水中分别有7株和3株与养殖废弃物中菌株携带相同CTX-M基因或同一 CTX-M组群基因同源性>80%,具有亲缘关系。结论1、山东省农村家庭式猪养殖地区,除蔬菜以外,产ESBL大肠埃希菌在养殖废弃物及其周边土壤和水体环境中广泛流行,耐药形势严峻,周边水体和土壤环境中与养殖废弃物中菌株的耐药特征总体一致。2、山东省农村家庭式猪养殖地区,养殖废弃物及其周边土壤和水体环境中产ESBL大肠埃希菌分子分型表现出多样性,没有明显集中进化趋势。3、动物源性耐药基因blaCTX-M-65和blaCTX-M-14在养殖周边土壤和水体环境中广泛流行,畜禽中广泛流行的序列型ST10型及其复合体在本地区养殖周边土壤和水体环境中多见,养殖周边土壤和水体环境中与养殖废弃物中菌株具有亲缘关系,可初步证明耐药性有从养殖废弃物向其周边环境传播的趋势。