论文部分内容阅读
目的 克隆、表达和纯化p53蛋白；制备鸡抗人p53蛋白的IgY抗体；建立血清p53蛋白和抗体的ELISA方法；初步描述血清p53蛋白和抗体在不同人群中的分布。 方法 扩增p53结构基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-4T-1中，在大肠杆菌B121中诱导表达；以纯化的融合蛋白为抗原免疫母鸡，得到抗p53—IgY；在此基础上建立间接ELISA和双抗体夹心ELISA方法，分别检测不同人群血清抗体和p53蛋白，采用描述性方法比较各组人群p53蛋白和抗体阳性情况。 结果 SDS—PAGE显示表达的GST-p53融合蛋白分子量约为80Kda；制备的抗p53—IgY可特异性识别原核细胞中的p53蛋白，不识别包括GST在内的其它细菌蛋白；间接ELISA和双抗体夹心ELISA检测结果显示，不同人群和不同恶性肿瘤的血清p53蛋白和抗体阳性率不同，蛋白阳性率最高的为职业暴露组(11.14％)和前列腺癌(12.50％)；抗体阳性最高的是恶性肿瘤组(14.59％)和卵巢癌(41.67％)；正常人群组蛋白和抗体阳性率分别为0.34％和1.02％；在部分癌前病变(如肝硬化、慢性乙肝、慢性胃炎、胃溃疡和慢性阑尾炎)中也检出p53抗体。 结论 p53血清学指标在一定程度上反映了暴露、疾病和基因变化情况。观察血清p53变化的规律有助于对接触环境和职业致癌物的高危人群进行健康监护以及恶性肿瘤患者的早期诊断。在临床疾病的监测以及肿瘤病人的诊断中，血清p53抗体的应用价值较大；在职业致癌物暴露的监测中则以血清p53蛋白更为敏感。血清p53指标作为一种高特异、无创性、方法简便的肿瘤和职业暴露标志物就具有一定的实用价值。