miR-296在前列腺癌细胞系中的功能研究

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大部分早期前列腺癌都是雄激素依赖性的,雄激素依赖性的LNCaP细胞系和非依赖性的CL-1细胞系是一对常用的研究雄激素作用的细胞系。我们通过miRNA芯片技术发现miR-296在雄激素类似物R1881刺激后的LNCaP细胞中表达上调2.73倍,同时用实时定量PCR检测发现,miR-296在CL-1细胞中比在LNCaP中表达高2.22倍。我们采用瞬时转染人工合成的带有2`端氧甲基修饰的miR-296正义序列和反义序列的方法来研究miR-296在前列腺癌细胞系中的生物学功能。转染miR-296的反义序列发现抑制miR-296引起CL-1细胞凋亡增加,同时在雄激素饥饿处理后的LNCaP细胞中转染miR-296反义序列,发现细胞生长放缓。这表明miR-296很可能在前列腺癌细胞系的雄激素调控网络中发挥作用。为了进-步探讨miR-296在前列腺癌细胞系中的作用,我们用MPSS技术比较了分别转染miR-296反义序列和同义序列的LNCaP细胞中基因在mRNA水平上的表达差异,共发现表达上调2倍以上的基因333个,通过生物信息学方法与软件预测的miR-296 target基因数据进行比对,从中筛选了15个基因进行半定量逆转录PCR验证,实验发现BTBD14B mRNA在转染miR-296反义序列的LNCaP细胞中表达量明显升高,序列比对发现BTBD14B存在两个重复保守序列与miR-296互补结合。本研究证明miR-296通过调控目标基因BTBD14B的mRNA表达,在前列腺癌细胞的生长和凋亡过程中发挥作用。
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