绢丝昆虫柞蚕卵黄原基因(Vg)5'端的克隆及序列分析

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本论文主要是对柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区DNA的克隆和序列分析。柞蚕(Antheraea pernyi)是属于鳞翅目(Lepidoptera)大蚕蛾科(Saturniidae)的一种野生绢丝昆虫,本文根据已解析的天蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区DNA序列利用昆虫卵黄原蛋白进化上的保守性,设计特异性的引物从柞蚕基因组DNA中扩增出约500bp的柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区DNA片段,经克隆、测序和分析后获得柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区序列,所解析柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区序列已登录GeneBank,登录号为EU330205。柞蚕卵黄原基因的转录启始位点位于启始密码子(ATG)上游55bp处。TATA框位于转录启始位点上游约30bp,位于启始密码子(ATG)上游-79~-86bp处,性别决定位点(BmDSX)位于启始密码子上游-156~-163bp处。此外,一些昆虫基因表达调控有关的元件如CREB,GATA,and CdxA等存在于柞蚕卵黄原蛋白基因5’端序列中。说明这些与基因表达调控有关的元件由于它们在基因表达调控中发挥重要作用,而被作为功能基因特异性的保留下列。目前国内外解析出的昆虫卵黄原蛋白基因5’端调控区序列还比较少,就蚕而言,已解析出卵黄原蛋白基因5’端调控区序列的除柞蚕外仅家蚕和天蚕两种。我们将所解析的柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区序列与家蚕和天蚕的进行对比发现柞蚕同家蚕的卵黄原蛋白基因5’调控区序列有着相当大的差异,在基因的同源性关系上远不如柞蚕与天蚕的同源性高,这是同我们已知的三种蚕亲缘关系远近是相符的。这样从另一方面证明了柞蚕,天蚕与家蚕三者之间的进化关系。柞蚕卵黄原基因5’调控区作为其卵黄原基因表达的重要调控部位其基因序列的解析对研究该序列在基因表达调控中的作用有着重要的意义,也为研究该序列中所含有的基因表达调控元件如TATA box,CdxA,GATA-X以及CRER等在基因表达调控中的作用提供了理论依据,并为BmDSX基因在昆虫性别决定中起调控作用提供了证据。
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