CCL20/CCR6/Th17轴与肝细胞癌血管浸润转移关系探讨

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背景和目的肝细胞癌(简称肝癌)是我国常见恶性肿瘤之一,目前仍缺乏有效的治疗手段,临床治疗主要以手术切除为主。肝癌极易发生肝内转移,主要是静脉血管转移,术后复发转移率极高,患者总体5年生存率很低。我们近期的工作发现,肝癌患者手术后复发的影响因素除肝癌组织本身主要是肿瘤大小因素外,根治性手术前患者血清中白细胞介素(IL)17水平的升高与患者术后不良预后相关,而IL-17主要由肝组织内浸润的Th17细胞产生。国内外学者的多个研究表明:IL-17具有促进血管新生而加速肿瘤生长作用,肿瘤微环境中有大量Th17细胞扩增。Th17细胞在肿瘤微环境中如何募集还不明确,其在肿瘤血管浸润中的作用仍需进一步研究。趋化因子是一类分子量为8–14KD的小分子多肽,通过与细胞膜表面具有七次跨膜结构域的G蛋白偶联受体结合,对多种免疫细胞发挥趋化作用,在特异性与非特异性免疫应答过程中发挥重要作用。在生理及病理条件下,趋化因子及其受体的相互作用参与机体多种生物学功能。Th17细胞表达趋化因子受体CCR6,其可与趋化因子CCL20发生特异性应答反应。本课题探究了CCL20/CCR6/Th17轴与肝细胞癌血管浸润转移之间的关系。方法采用SYBR Green实时定量PCR测定人肝细胞系L-02,及肝癌细胞系Hep3B,Huh7,和HepG2中CCL20mRNA的表达,ELISA检测其上清中CCL20蛋白的分泌,采用Transwell迁移实验分析肝癌细胞系对人外周血单个核细胞的趋化作用。采用9-plexArray, ELISA法定量测定93例肝细胞癌患者,其中51例发生血管浸润转移(转移组),42例无血管转移(无转移组)的术前外周血中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、IFN-γ,TNF-α和CCL20的血清浓度;应用SYBR Green实时定量PCR检测了其中41例患者(转移组20例,无转移组21例)肝癌癌组织及相应癌旁组织中CCL20和CCR6的表达,免疫组织化学染色法检测肝癌癌组织、对应癌旁组织及正常人供肝组织CCL20的表达。结果人肝癌细胞系中CCL20的表达分泌较正常肝细胞显著升高,对外周血表达CCR6+的T细胞具有趋化作用。93例肝细胞癌患者血清中CCL20的血清浓度相对于10例肝血管瘤患者显著升高,其血清CCL20水平与肿瘤大小及血清IL-17水平均呈正相关。41例肝癌癌组织CCL20mRNA表达显著高于癌旁组织(P<0.001),CCL20主要表达在肝癌细胞浆中,浸润的免疫细胞也有部分表达。多因素分析发现:有血管浸润转移的肝癌患者(转移组)术前外周血CCL20的水平为36.19(16.42-55.49) pg/ml,显著高于无转移组的20.11(13.68-28.39) pg/ml,P<0.05,并且,转移组患者血清IL17浓度为1.10(0.50-1.85) pg/ml,也显著高于无转移组的0.20(0.30-0.50) pg/ml, P<0.05。对41例肝癌组织中CCL20,CCR6基因的表达水平分析发现:CCL20的表达水平在肝癌的血管浸润转移组与无转移组之间无统计学差异,但转移组的肝癌癌组织及癌旁组织中CCR6的表达水平显著高于无转移组。结论CCL20/CCR6/Th17轴可能促进肝细胞癌的血管浸润转移。
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