论文部分内容阅读
为探讨三氯化铝(Al Cl3)抑制骨形成的分子机制,本实验将200只4周龄雄性Wistar大鼠随机分成染铝组(AlCl3·6H2O,64mg/kg?B.W.)和对照组(蒸馏水)。实验设染铝30d、60d、90d、120d四个检测点,记录大鼠临床症状和体重,取血清及股骨组织。采用双能X线骨密度仪检测骨密度(BMD);采用火焰原子吸收分光光度法测定血清和骨组织中铝含量,q RT-PCR技术检测Wnt3a、Fzd2、LRP5、β-catenin、TCF4、c-myc、cyclin D1、Dkk1、s FRP1mRNA的表达;ELISA方法检测Fzd2、LRP5受体活性;western blot方法检测Wnt3a、β-catenin蛋白的表达;采用EMSA方法检测核转录因子TCF4转录活性,结果表明:(1)染铝组大鼠体重显著低于对照组(P<0.01),说明AlCl3暴露抑制大鼠正常的生长发育。(2)染铝组大鼠BMD在120d显著低于对照组(P<0.05),说明Al Cl3暴露可诱发骨丢失,抑制骨形成。(3)染铝组大鼠血清和骨中铝含量均显著高于对照组(P<0.01),说明铝可在大鼠骨组织中蓄积。(4)染铝组大鼠骨中Wnt3a m RNA及蛋白表达量,Fzd2、LRP5 mRNA表达量及膜受体活性,自染铝60d显著低于对照组(P<0.05;P<0.01),说明AlCl3可抑制Wnt3a/β-catenin信号通路的启动。(5)染铝组大鼠骨中β-catenin mRNA及蛋白表达量,核转录因子TCF4 m RNA表达量及转录活性自染铝60d显著低于对照组(P<0.05;P<0.01),说明Al Cl3下调Wnt3a/β-catenin信号通路,并抑制核转录因子活性。(6)染铝组大鼠骨中c-myc、cyclin D1 mRNA表达量自染铝60d极显著低于对照组(P<0.01),说明AlCl3抑制Wnt3a/β-catenin信号通路下游靶基因的表达。(7)染铝组大鼠骨中Dkk1 mRNA表达量自染铝60d显著高于对照组(P<0.05;P<0.01);s FRP1 mRNA表达量自染铝90d显著高于对照组(P<0.01),说明Al Cl3可诱导Wnt3a/β-catenin信号通路抑制因子的表达,从而抑制Wnt3a/β-catenin信号通路的启动。上述结果说明,铝可促进Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Dkk1、sFRP1的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活,从而下调核转录因子TCF4的表达,导致骨中骨形成相关基因c-myc和cyclin D1的表达减少,最终造成骨形成抑制。