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母猪产仔数的高低是衡量猪繁殖性状的重要指标,也是决定企业经济效益的关键因素,但由于猪本身的制约性,使得遗传改良进展缓慢。随着基因工程技术的发展,利用转基因技术培育新品种已成为如今育种工作的主要途径,而动物种质资源的创新也进入到了一个全新的发展时期。研究表明,HOXA11基因在子宫内膜形态的构建、子宫周期性形态的变化、子宫容受性的建立、胚胎的着床及附植等方面发挥着重要的作用,且HOXA11基因受雌激素、孕激素等多种因素的调控。本实验选取与猪繁殖性状密切相关的HOXA11基因作为研究对象,对其转录调控机制进行初步分析研究,主要获得以下结果:(1)利用比较基因组学和RT-PCR的方法,克隆了猪HOXA11基因的cDNA序列,得到该基因的CDS全长,共951bp。同时分析了该基因的结构,猪HOXA11基因含有两个外显子,72bp的5’UTR和1576bp的3,UTR。(2)利用RT-PCR的方法,检测了猪HOXA11基因在成年梅山猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、肌肉、淋巴和子宫内膜10个组织中的,结果显示猪HOXA11基因在子宫内膜特异表达,在其他几个组织中几乎不表达。(3)在大白和梅山这两个品种的四个不同时期(发情15天、妊娠15天、妊娠26天、妊娠50天)对HOXA11基因的表达情况进行了检测,结果显示在大白猪中,妊娠15天时该基因的表达量要高于其他时间点,在妊娠50天时,表达量最低;而在梅山猪中,从发情15天一直到妊娠26天,HOXA11基因持续高表达,但在妊娠50天时,该基因的表达量也同样降低。(4)通过生物信息学的方法,克隆了猪HOXA11基因的启动子序列,并构建了5’端缺失启动子载体,分析双荧光素酶活性检测结果显示,猪HOXA11基因2kb启动子载体具有较高的启动活性,是pGL3-Basic空载体活性的5倍;对该基因的启动子序列进行预测分析后发现,该启动子可能与转录因子AP1、c-JUN、OCT-1、 GATA-3有较高的结合活性;将该启动子载体分别转染PK15、C2C12和Ishikawa细胞系,分析结果后发现该启动子并非子宫内膜特异表达,在其他两种细胞系中也有表达,但活性低于子宫内膜的活性。(5)孕酮体外注射怀孕小鼠,分别采用2mg和4mg的剂量,以未处理的正常怀孕小鼠作为阴性对照,分别在怀孕4天、5天和6天采集小鼠子宫内膜样品,分析HOXa11基因的表达情况,结果显示体外孕酮刺激可提高小鼠子宫内膜HOXa11基因的表达,且2mg的效果要好于4mg,但在怀孕6天,孕酮刺激所产生的差异不显著。分析该基因的本底表达量发现,怀孕4天和5天,小鼠HOXa11基因的表达量要高于怀孕6天,但差异并不显著。以上的研究结果,可以为探讨猪HOXA11基因的转录调控机制提供初步的实验依据,并为转基因载体的构建以及转基因动物的制备提供实验材料。