研究背景：类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以慢性进行性对称性关节炎为主要临床表现的疾病，早期以关节的滑膜炎、细胞浸润、血管翳形成为主，中晚期累及软骨及骨质，导致骨质疏松，甚至关节结构出现破坏而引起畸形、功能障碍，从而增加了RA致残率。RA骨代谢异常可能与多种炎症因子的作用有关，过量炎症因子不仅可以造成持续性滑膜炎症，同时还可以激活破骨细胞，使骨吸收加速，造成快速骨流失破坏骨组织微环境导致关节损害。这是RA患者病程前3个月快速骨流失、关节损害的主要原因。近年来研究表明，RA疾病早期即可发生关节端的骨质疏松及不可逆的关节骨破坏,继而出现全身的骨质疏松症（osteoporosis，OP）,有多达60%-80%的RA患者合并OP，严重影响患者生活质量，同时造成巨大的社会经济负担。糖皮质激素（Glucocorticoid，GC）因其强大的抗炎及免疫调节作用而广泛用于RA的治疗，但是，由于长期大量应用GC会导致骨质疏松症，增加骨折的发病率，因此其应用颇受争议。随着人们对小剂量糖皮质激素（low dose glucocorticoid，LGC）治疗RA认识的加深，对其疗效及对RA预后的改善有了新的期待，与GC引起骨的不良反应相比，GC可以控制RA患者炎症反应、降低疾病活动度，有减轻关节损害的作用，其积极的治疗作用可能部分抵消了它对骨的不良作用。GC的作用主要是通过与糖皮质激素受体（Glucocorticoid Receptor，GR）结合实现的，近年来的研究认为糖皮质激素受体可能参与了RA的发病。miRNA是一类内源性短小非编码RNA，能够在转录后水平上对基因的表达进行负调控。新近研究还发现miRNA表达异常可能是RA发病的分子机制之一，在RA关节滑膜、滑液、外周血中都有异常表达的miRNA，它们可能与RA炎症过程、骨流失、关节骨及软骨的破坏密切相关。本研究拟应用LGC短疗程治疗RA，通过观察RA患者骨代谢的变化、GR mRNA表达的变化、miRNA表达的变化以及NK细胞对RA患者骨代谢异常的影响，探讨LGC的作用机制，为指导临床工作提供客观依据。目的：1.研究小剂量糖皮质激素短疗程治疗对RA骨代谢的影响；2.研究LGC对人类糖皮质激素受体hGRα和hGRβmRNA表达的影响；3.研究LGC对RA miRNA表达及其靶基因的影响。4.研究RA对骨代谢的影响。通过以上研究，探讨LGC对RA骨代谢的作用机制，为指导临床工作提供客观依据。方法：选取绝经后女性早期类风湿关节炎病情活动患者为研究对象，并选取同期于体检中心体检的绝经后健康女性为对照组。入选患者随机分为小剂量糖皮质激素治疗组(LGC组)和非激素治疗组(NGC组)，在试验开始时和3个月时分别测量炎症指标（IL-6、IL-1α、TNF-α、CRP和ESR）、骨代谢标志物（骨形成标志物BGP、BAP和PICP，骨吸收标志物uDPD和CTX）和骨密度；应用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-FQ-PCR)检测外周血单个核细胞hGRα和hGRβ mRNA的表达情况；应用基因芯片技术对LGC治疗前后的患者进行miRNA分析，并对miRNA靶基因进行鉴定，应用KEGG数据库对差异表达的miRNA聚类结果进行注释。结果：1.绝经后早期RA疾病活动患者低骨量和骨质疏松症发病率高于健康对照组（P＜0.05），差异有统计学意义。2.与健康对照组相比，RA患者外周血中炎症指标IL-6、IL-1α及TNF-α水平明显增高（P＜0.01），骨形成标志物BGP、BAP和PICP明显降低（P＜0.05），骨吸收标志物uDPD和CTX明显增高（P＜0.05）。3.基线时，LGC组与NGC组间各观察指标均无明显统计学差异（P＞0.05）。试验3个月时， NGC组的IL-6、IL-1α、CRP及ESR明显下降，与基线时相比，有统计学差异（P＜0.05）；LGC组的IL-6、IL-1α、CRP及ESR明显下降，与基线时相比，有显著统计学差异（P＜0.01）；两组相比，LGC组IL-1α明显降低，有统计学差异（P＜0.05）。试验3个月时，两组相比，LGC组的骨形成标志物检测值有所增加，骨吸收标志物检测值有所下降，但无明显统计学差异（P＞0.05）。与基线时相比，两组在3个月时BMD略有增高，但无统计学差异（P＞0.05）。4.基线时，RA患者外周血单个核细胞hGRα mRNA和hGRβ mRNA的表达均高于健康对照组（P＜0.01）。5.试验3个月时，LGC组hGRα mRNA表达水平明显降低，但仍高于健康对照组（P＜0.05），与基线时比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；NGC组hGRα mRNA表达水平无显著降低（P＞0.05）；两治疗组间hGRα mRNA表达水平比较差异有统计学意义（P＜0.05）。6.试验3个月时，LGC组和NGC组hGRβ mRNA的表达水平均无显著变化（P＞0.05）。7.人miRNA芯片实验：根据变化倍数和差异分数两项参数得到LGC治疗前后样本差异最显著的miRNA13个（hsa-miR-34a、 hsa-miR-134、 hsa-miR-200b、hsa-miR-106b*、hsa-miR-1281、hsa-miR-188-5p、hsa-miR-202*、hsa-miR-219-1-3p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-513b、hsa-miR-521、hsa-miR-548f和hsa-miR-645），经LGC治疗后这些miRNA表达均上调。8.通过对外周血相关miRNA及其靶基因ULBP2和配体基因NKG2D的表达水平进行验证，LGC治疗后has-miR-34a表达水平上调（P＜0.05）,靶基因ULBP2和配体基因NKG2D表达水平均下调（P＜0.05）。9.通过对13个表达下调的miRNA靶基因聚类分析，应用KEGG数据库对聚类结果进行注释，共得到4个差异显著的KEGG通路（校正后P＜0.00001），分别是细胞黏着斑信号通路、mTOR信号通路、趋化因子信号通路和凋亡信号通路。结论：1.绝经后女性早期RA疾病活动患者低骨量、骨质疏松症发病率高于正常人。2.小剂量糖皮质激素短期治疗可以通过控制炎症使早期类风湿关节炎患者骨形成增加、抑制骨吸收、减少骨流失。3.小剂量糖皮质激素短期治疗早期类风湿关节炎对骨代谢无负性影响，不会增加骨质疏松症发病率。4. hGRα mRNA和hGRβ mRNA表达增加可能与RA发病有关，LGC可显著降低RA患者外周血单个核细胞hGRα mRNA表达。5.小剂量糖皮质激素治疗RA可以使外周血13个miRNA（hsa-miR-34a、hsa-miR-134、 hsa-miR-200b、 hsa-miR-106b*、 hsa-miR-1281、 hsa-miR-188-5p、hsa-miR-202*、 hsa-miR-219-1-3p、 hsa-miR-455-5p、 hsa-miR-513b、 hsa-miR-521、hsa-miR-548f、hsa-miR-645）表达上调，其中has-miR-34a在外周血及膝关节滑液中表达上调最明显。6.小剂量糖皮质激素可以通过上调has-miR-34a表达，负调控靶基因ULBP2，改变NKG2D活性，降低NK细胞活性。7.小剂量糖皮质激素可以上调RA患者外周血miRNA表达，对与其靶基因有关的信号通路起抑制作用。8.小剂量糖皮质激素可以降低NK细胞活性，减少RA骨流失，对关节侵蚀起保护作用。