帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)是一种老年神经系统退行性疾病,PD患病率呈逐年上升趋势,在老年退行性疾病中发病率位居第二,仅次于阿尔茨海默病,发病率已达1.03%。目前临床所用的治疗PD药物数量少,且均有长期用药后疗效下降并出现严重不良反应等缺点,因此,开发高效低毒的PD防治药物显得尤为迫切。益智仁为姜科类植物益智(Alpinia Oxyphylla Miq.)的成熟干燥果实,是我国著名的四大南药之一。为了加快益智药材的开发,我国药学工作者对其进行了较系统的研究。研究发现,益智仁主要化学成分为挥发油类、微量元素、萜类、黄酮类及庚烷类等,其中挥发油占1%~2%,研究益智仁化学成分的重点为挥发油成分,用气质联用法已经分析出100余种化学成分,含量较高的有聚伞花烃、香橙醛、芳樟醇、桃金娘醛、α-蒎烯、β-蒎烯等,还含有锌、铜、铁、锰、钴、镁、钙等微量元素,其中锌、锰的含量远远高于其他补益药。现代医学研究表明,益智仁具有强心、抗癌、抗过敏、抗衰老、镇静、镇痛等多方面药理作用。近年来,以益智仁为主的方剂在益智健脑方面的临床应用越来越多,并且在动物实验中进一步证实益智仁具有良好的脑保护作用,可用于老年性痴呆及其他智能障碍类疾病的治疗,对神经细胞有抗氧化、抗衰老、减轻兴奋性毒性和抗凋亡作用。鉴于益智主产于海南岛,且现已大面积栽培,产量高、品质好。因此,充分利用益智进行深加工,研究益智仁挥发油对PD的作用,开发益智仁挥发油作为PD治疗药物很有必要,亦有特色。目的:研究益智仁挥发油对实验性PD的作用,并初步研究其作用机制。方法:(1)水蒸气法提取益智仁挥发油,采用气相色谱法分析实验过程中所用益智仁挥发油的化学成分,研究其可控性及稳定性;(2)采用小鼠BLISS法,对益智仁挥发油进行急性毒性研究,测定其LD50;(3)1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl- 1,2,3,6- tetrahydropyri-dine,MPTP)腹腔注射建立C57BL小鼠PD模型,对PD小鼠进行游泳、自主活动、水迷宫行为学实验,观察益智仁挥发油对MPTP所诱导PD的保护作用;(4)建立PD小鼠模型,溶剂提取法分离小鼠纹状体内DA、5-HT,层析法分离小鼠纹状体内HVA,荧光分光光度计法测定DA、5-HT、HVA含量,观察益智仁挥发油对小鼠脑内单胺类神经递质的保护作用;(5)紫外分光光度计法测定PD小鼠纹状体内SOD活力,MDA、GSH含量;(6)采用免疫组化法,分析益智仁挥发油对小鼠黑质致密部神经细胞TH、BCL-2及CASPASE-3蛋白表达的影响,采用TUNEL细胞凋亡技术分析益智仁对小鼠黑质致密部神经细胞凋亡的影响。结果:(1)益智仁挥发油主要化学成分稳定,质量可控;(2)BLISS法测得益智仁挥发油LD50为8.327ml·kg-1;(3)行为学实验结果显示益智仁挥发油能对抗MPTP所诱导的PD小鼠游泳时间缩短,并且缩短了小鼠游出水迷宫的潜伏期和错误次数,但对小鼠自主活动减少无明显影响;(4)预先给予益智仁挥发油可明显抑制MPTP所引起的小鼠脑组织内GSH含量下降和MDA生成增加,且能抑制纹状体SOD活力的下降;(5)益智仁挥发油能阻遏PD小鼠纹状体内单胺类神经递质下降,预先给予益智仁挥发油可明显抑制小鼠脑内DA、HVA、5-HT含量降低;(6)益智仁挥发油可增加PD小鼠黑质致密部(SNc)TH、BCL-2蛋白的表达,降低SNc内CASPASE-3表达,同时能抑制PD小鼠黑质致密部神经元细胞的凋亡。结论:(1)益智仁挥发油成分稳定、可控;(2)益智仁挥发油毒性甚微,发现益智仁挥发油能对抗PD所致的小鼠行为学改变;(3)通过对益智仁挥发油抗实验性帕金森病机制的初步研究,发现其抗PD机制可能与下列因素有关:①增强对氧自由基的清除能力,抑制脂质过氧化反应;②抑制MAO-B活性,阻遏PD小鼠脑内DA、HVA、5-HT分解代谢;③益智仁挥发油能增加自身抗氧能力,调节与细胞凋亡密切相关的BCL-2、CASPASE-3、TH等调控蛋白的含量和表达,抑制细胞凋亡。