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目的：多囊卵巢综合症（polycystic ovary syndrome，PCOS）是一种育龄妇女最常见的内分泌疾病，是女性排卵障碍的常见病因，且发病率呈不断上升趋势。生长分化因子-9（growth differentiation factor-9，GDF-9）作为卵母细胞分泌的细胞因子，与卵泡的生长发育密切相关。目前已有研究显示，GDF-9基因敲除的雌鼠出现了卵泡生长发育停滞、异常的膜发育和囊肿形成等与PCOS患者相似的表现。临床研究也显示，PCOS患者卵巢GDF-9mRNA的表达延迟、降低。本研究通过观察药物达英-35及二甲双胍对PCOS大鼠卵泡发育过程中GDF-9表达改善情况，探讨其对多囊卵巢综合症患者中卵泡发育停滞、优势化选择受阻的治疗意义。
方法：选85日龄左右雌性Sprague Dawley（SD）大鼠60只，采用Poretsky法建立PCOS大鼠模型，造模成功后随即将大鼠分成四组，A组15只，B组15只，C组15只，D组15只。A组给予达英-35，B组给予二甲双胍，C组给予达英-35及二甲双胍，D组为对照组，给予等量蒸馏水。四组大鼠分别干预16天后，禁食水。于第17天取血后处死取出双侧卵巢，称重后将卵巢延其长径剖开，一侧卵巢于中性福尔马林中固定24h后制作石蜡包块，应用免疫组化法测定GDF-9在卵巢中的分布和表达。对侧卵巢冷冻于液氮中保存。
结果：
1.大鼠体重：
达英-35联合二甲双胍组及二甲双胍组处理后的PCOS大鼠体重较对照组及单独应用达英组大鼠体重减轻，差异有显著统计学意义（P<0.01）。达英-35联合二甲双胍组与二甲双胍组之间大鼠体重未见差异（P>0.05）。达英-35组与对照组之间大鼠体重未见差异（P>0.05）。
2.卵巢大体解部形态观察：
对照组卵巢体积明显增大，表面苍白，并可见多个囊状扩张的卵泡，黄体减少；给予达英-35和或二甲双胍干预后的三组大鼠卵巢色泽较红润，体积较小，卵巢表面黄体组织明显较对照组增多。
3.卵巢组织学检查：
卵巢组织学检查：对照组可以看到大鼠卵巢组织结构紊乱，可见大量闭锁卵泡及囊状扩张的卵泡，其中夹杂少数发育正常的卵泡，颗粒细胞层数减少至2-3层，卵冠丘复合体消失，黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化见Fig.3，Fig.4；而达英-35和或二甲双胍处理组光镜下大鼠卵巢结构较完整，可见不同发育阶段的卵泡及较多黄体，卵泡内颗粒细胞呈多层，多为8-9层。
4.血清性激素水平比较：
用药物处理后三组大鼠血清LH、T均较用药前及对照组下降（p<0.01）。达英-35联合二甲双胍组血清LH、T较达英-35组及二甲双胍组下降明显（P<0.05），达英-35组血清LH，T较二甲双胍组下降明显（P<0.01）。对照组处理后血清T较用药前升高（P<0.01）。达英.35联合二甲双胍组及二甲双胍组血清INS较单用达英-35组及对照组降低（P<0.01）。达英-35联合二甲双胍组与二甲双胍组比较血清INS未见差异（P>0.05）。达英-35联合二甲双胍组及二甲双胍组与自身用药前比较血清INS未见差异（P>0.05）。
达英-35组与对照组血INS浓度未见差异（P>0.05），然达英-35组与对照血分别与自身处理前比较血INS水平进一步升高（P<0.01）。
5.GDF-9在PCOS造模大鼠和药物干预大鼠中的表达
免疫组化结果显示：对照组大鼠原始卵泡卵母细胞的胞浆中未见GDF-9表达，可见GDF-9表达于发育正常的初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡卵母细胞的胞浆中，在颗粒细胞、卵泡液中GDF-9也有不同程度的表达。给予达英-35和或二甲双胍处理后的三组大鼠原始卵泡中可见GDF-9表达，且在初级卵泡、次级卵泡和窦状卵泡卵母细胞中表达强度均高于对照组大鼠的表达（P<0.05）。联合应用达英-35及二甲双胍组GDF-9表达强度高于单用达英-35或二甲双胍组（P<0.05）。然单用二甲双胍组与单用达英组卵巢GDF-9表达未见差异（P>0.05）。
结论：
1.二甲双胍在控制PCOS大鼠体重方面有效。二甲双胍联合达英-35用药也未能使二甲双胍在控制大鼠体重方面的作用增强。达英-35在控制大鼠体重方面却未见与对照组有差异。
2.达英-35及二甲双胍均可使PCOS大鼠血清LH及T下降。且达英-35的作用优于二甲双胍。达英-35联合二甲双胍用药可使其对PCOS大鼠血清LH及T的调节作用增强。二甲双胍对PCOS大鼠血清FINS有降低作用。而达英-35却未见有相同作用。二甲双胍联合达英-35给药并不能使其对INS的作用增强。对照组大鼠血清T、INS则显示有进一步增高趋势。提示PCOS大鼠体内内分泌环境紊乱，即使诱发因素去除，如不给予及时干预，体内T、INS则会进一步发展。
3.通过免疫组化方法发现GDF-9在对照组的原始卵泡卵母细胞胞浆中未见表达，而给予药物达英35和或二甲双胍后处理组原始卵泡卵母细胞胞浆中可见GDF-9表达。说明GDF-9对PCOS卵泡发育异常的影响在原始卵泡阶段就已出现，且可能更明显。提示达英-35及二甲双胍片对PCOS卵泡发育的影响可能始于原始卵泡，即卵泡发育的非促性腺激素依赖阶段。推测在使用达英-35及二甲双呱片治疗多囊卵巢综合症方面药物使用的时机和周期可能更重要。