实时荧光定量PCR法检测儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的建立

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现代的治疗条件下,95%的急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿都可以达到完全缓解(CR),即在骨髓中白血病幼稚细胞的比例小于5%;但不幸的是,仍有大约25%的病人最终复发。在大多复发的病例中,复发是由于诊断时相同或相关的白血病细胞克隆细胞引起的,表明经过治疗缓解后还持续存在显微镜不能发现的自血病细胞,通常临床诊断儿章急性白血病时,患儿体内已有肿瘤细胞的负荷为1012~1013,经化疗缓解后白血病细胞总数控制在1010以下,这些经常规的形态学不能分辨的细胞即称为微小残留病(MRD),白血病的复发起源于这些残留细胞的克隆增殖。因此,对治疗过程中的MRD监测显得十分重要。 自血病微小残留病检测重点在于能够发现白血病细胞上面的特异标记,能敏感的发现90%ALL病人MRD的方法是用PCR扩增的方法发现Ig/CR基因重排,重排后的融合基因序列具有高度变异性,这些特异的基因重排可作为监测ALL MRD的分子标记。用PCR的方法扩增这些序列,能够从104-106个正常细胞中发现1个白血病细胞。对MRD进行定量的PCR方法包括稀释法、竞争PCR的方法和实时定量PCR的方法,但前两种方法实验操作过程复杂,对常规的临床应用缺乏吸引力,实时荧光定量PCR是最近发展的新技术,能够对每次扩增产物进行监测,实时荧光定量PCR包括探针法和染料法两种,但荧光标记探针法比较昂贵、并且共有探针并不是适合与所有基因重排,相比而言,SYBR Green I染料法比较便宜,并且更有利于常规应用而不仅限于实验室研究,本实验是用SYBR Green I染料PCR方法,以Ig/TCR基因重排作为追踪的分子标记,对MRD水平进行检测。
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