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目的:1.建立SLE固相支撑液液萃取、GC-MS/MS同时检测去痛片及其代谢物的方法;2.观察去痛片及其代谢物在大鼠体内的分布;3.观察去痛片及其代谢物在中毒死亡者体内的死后分布。方法:1.方法建立利用去痛片及其代谢物标准品,建立SLE固相支撑液液萃取,GC-MS/MS法同时检测去痛片及其代谢物。2.标本采集16只雄性SD大鼠,分为两组,每组8只。禁食12h后,经口灌服去痛片950mg/kg,A组于1.5h脱臼处死,取心血肝素抗凝、心肌、肺、肝脏、脾、肾、上肢肌肉、下肢肌肉、脑组织置于-20℃待检。B组于24h脱臼处死,取心血肝素抗凝,并收集24h尿液,置于-20℃待检。中毒案例样品2例,来源于山西医科大学司法鉴定中心。3.提取检测待检生物样品中添加烯丙基异丙基巴比妥(50μg/m L),氨基比林-13C2(25μg/m L)混合内标工作液80μL,经SLE固相支撑液液萃取,GC-MS/MS检测,MRM模式扫描,利用保留时间、定量离子与定性离子对比例定性,内标法和工作曲线法定量。4.数据处理数据用SPSS 20.0进行正态性检验和方差分析。各脏器间含量用Graphpad 6.0进行Kruskal-Wallis H检验,各组间用Dunn’s检验多重比较得出统计学结果,P<0.05时,认为各组间有统计学差异。结果:1.空白血液加入去痛片及其代谢物标准品,经SLE分别用正己烷、二氯甲烷、乙醚、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯2m L淋洗,结果乙酸乙酯同时提取去痛片及其代谢物的提取回收率MAA为37.57%±0.62%,AAA为41.99%±1.21%,其余化合物均在58.19%±1.41%~95.87%±1.79%之间,相较其他溶剂有较高的提取回收率。2.GC-MS/MS法可同时检测去痛片及其代谢物,血液、尿液、肝脏加标样品在0.125μg/m L~16.00μg/m L呈线性关系,血液样品工作曲线相关系数r为0.9896~0.9997,最低检测限为0.23ng/m L~14.48ng/m L;尿液样品工作曲线相关系数r为0.995~0.9997,最低检测限为0.08ng/m L~4.71ng/m L;肝脏样品工作曲线相关系数r为0.9953~0.9997,最低检测限为0.16ng/m L~11.18ng/m L。方法准确度为79.64%~122.91%,日内精密度为0.99%~7.43%,日间精密度为2.19%~10.60%,3.经口灌服950mg/kg去痛片,1.5小时后去痛片及其代谢物在大鼠体内的分布:氨基比林血液含量>上、下肢肌肉含量,P<0.05。MAA血液、肝脏含量>下肢肌肉含量,P<0.05。AA血液、上、下肢肌肉、肝脏、肾脏、心肌含量>胃壁含量,P<0.05。FAA和AAA各脏器间含量无统计学差异。非那西丁血液、肺脏、脾脏含量>肝脏含量,P<0.05。APAP血液、下肢肌肉、心肌、肾脏、肝脏、脾脏含量>胃壁含量,P<0.05。咖啡因血液、肝脏含量>上、下肢肌肉、脑组织含量,P<0.05。17X、37X、13X各脏器间含量无统计学差异。苯巴比妥肝脏含量>脾脏、脑、上、下肢肌肉含量,P<0.05。经口灌服去痛片24h后,血液中MAA、AA含量高于FAA,P<0.05。非那西丁和APAP,咖啡因和17X、37X、13X间含量均无统计学差异。24小时尿液中AAA含量高于AM、MAA、FAA,APAP含量高于非那西丁,P<0.05。咖啡因和其代谢物含量无统计学差异。结论:1.经SLE固相支撑液液萃取,同时提取生物样品中去痛片及其代谢产物,乙酸乙酯较正己烷、二氯甲烷、乙醚和甲基叔丁基醚有较高的提取回收率。2.GC-MS/MS法可同时检测生物样品中去痛片及其代谢产物,利用保留时间和二级质谱图定量离子和定性离子对比例定性,利用内标物与目标物峰面积比值,内标法和工作曲线法定量。方法回收率高、专属性强、特异性高、内源性物质对目标物检测干扰小,方法灵敏度高、准确度高,可满足去痛片中毒案例定性、定量的要求,可应用于去痛片相关案例的法医学鉴定实践中。3.去痛片及其代谢物在大鼠体内的分布不均匀,口服去痛片中毒案例中优先选择胃内容物和胃壁作为检材,还可提取肝、肾、心血作为检材。针对氨基比林、非那西丁、咖啡因和苯巴比妥单一药物或复方制剂中毒的案例,应根据药物的分布特点,科学全面地选取检材,且应该考虑到药物所处吸收时相或消除时相时对各脏器分布的影响,以便为中毒案件提供科学的依据。