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目的:肾阳虚证是中医常见临床辩证基本证型之一,其临床表现主要有面色苍白,腰膝无力,精神萎靡,四肢厥冷,夜尿频多,小便清长,或肢肿气短,在男、女分别可有与生殖系统相关症状,如男子可有遗精、阳痿;女子可见带下清稀,宫寒不孕等症状,在望闻问切四诊中的望诊及触诊(特指脉诊)上可出现舌淡苔白而润,脉虚弱无力。中医认为阳气,是推动人体生长发育、新陈代谢的物质,因此自古以来各朝代的医家对因阳气的亏虚导致的各种疾病的论述也十分之多。目前,已有大量试验及文献证实中医疗法能够提高机体免疫系统功能、调整免疫功能紊乱。大量研究表明,肾阳虚可导致机体免疫系统功能低下甚至机体免疫功能紊乱。笔者通过翻阅古籍及临床报道发现,艾灸对于防治肾阳虚类疾病的治疗效果显著,因其医疗成本低廉无痛苦及副作用而能被患者接受,有必要将其运用于更为广大的患者人群,进行推广和发展。灵龟八法是我国传统中医的瑰宝之一,是一种古老的择时选穴法,其时间和穴位的选择是用与奇经八脉相通的八个穴位按照八卦系统的阴阳,五行,干支,数术,方位等信息,推算出最佳的人体与自然联系之时的穴位。这种按时取穴法体现了“天人相应”的中医诊疗整体观及宇宙生物观。有学者通过大量实验研究发现灵龟八法能提高临床治疗效果,提升人体免疫能力。本课题通对肾阳虚模型大鼠进行灵龟八法开穴灸治疗,观察其对肾阳虚模型大鼠的影响,初步探讨灵龟八法开穴灸对免疫系统功能调节的影响,并为临床运用灵龟八法开穴灸防治肾阳虚证提供科学的实验依据和理论指导。方法:选用SD雄性大鼠50只,体重250g左右,(SPF级,湖北省实验动物研究中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2012-0068)。随机分为:阳性空白对照组(A组),足三里、肾俞温和灸组(B组),灵龟八法开穴灸组(C组),灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组(D组),正常大鼠视为阴性空白对照组(E组),共5组,每组10只。每天将SD大鼠按照每只3mg/100g·d的标准进行大腿肌肉注射醋酸泼尼松注射液(AHP),连续一周。通过中医八纲辩证参考标准,大鼠出现毛色暗淡、背部拱起、被毛疏松、身体蜷曲、精神萎靡、反应呆滞、身体消瘦、四肢尾冷、蜷缩在一起、不耐低温、食欲减退、毛发脱落等一系列虚损症状,模型大鼠所表现出的这一系列体征与“肾阳虚证”状态高度一致,说明此次试验所建立的肾阳虚大鼠动物模型属成功模型。B、C、D组按照规定取穴使大鼠每天每穴温和灸15分钟,左右交替进行,连续2周。灵龟八法开穴法依据《子午流注与灵龟八法临床应用盘》[魏晋盛,《子午流注与灵龟八法临床应用盘》[M],山西科学技术出版社.2010年10月,第一版]简易法选穴。A、E组大鼠只抓取,不做治疗。大鼠于第15天分别进行取样,送检进行流式细胞术的标本使用全血以检测各种大鼠血液CD4+/CD8+比值;送检进行ELISA法检测的标本使用离心血清以检测各组大鼠血液工L-2水平;送检进行ELISA法检测的标本使用离心血清以检测各组大鼠血清IgM, IgA,IgG水平;初步进行肾脏的湿重、干重、体积的测量,分别计算出大鼠肾脏组织的密度及干湿比。进行数据进行统计分析。结果:1.本次5组实验大鼠的T细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+数值检测结果:足三里、肾俞温和灸组、灵龟八法开穴灸组、灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组均能显著提高外周血T淋巴细胞免疫功能。在肾阳虚大鼠T淋巴细胞亚群CD4+、CD4+/CD8+数值变化影响方面,灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组比前两组(B组、C组)效果更加显著(P<0.05),使CD4+、CD4+/CD8+数值升高,而使CDS-数值下降。2.本次5组实验大鼠血清采集样本通过ELISA法检测IgA、IgM、IgG水平数值:足三里、肾俞温和灸组、灵龟八法开穴灸组、灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组均能提高其血清IgA、IgM、IgG水平。在肾阳虚大鼠通过ELISA法检测IgA、IgM、IgG水平数值方面,灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组比前两组(B组、C组)效果更加显著(P<0.05)。3.本次5组实验大鼠肾脏采集样本进行初步测量其肾脏组织密度及干湿比数值显示:B组、C组、D组均可以增加他们的肾脏组织密度及干湿比的数值水平。在其数值的影响方面,D组与B、C组相比,效果更加突出(P<0.05)。结论:1.灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组能使肾阳虚证模型大鼠CD4+、CD4+/CD8+数值升高,而使CD8+数值下降,进而提高外周血细胞免疫功能,对肾阳虚证所导致的免疫功能低下改善明显。2.灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组能提高肾阳虚证模型大鼠血清IgA、IgM、IgG水平,从而可见其在提高机体免疫功能方面效果显著。3.灵龟八法开穴灸结合足三里、肾俞温和灸组能有效改善受试大鼠肾脏组织密度、干湿比的数值水平,明显改善大鼠临床表现,其效果显著。