【摘 要】
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目的:研究姜黄素联合5-Aza-CdR是否能增强对骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化作用。方法:(1)单独或联合使用不同质量浓度的姜黄素与5-Aza-CdR作用于骨肉瘤细胞;(2)观察细胞的生长情况和形态变化(采用倒置相差显微镜);(3)CCK-8法检测细胞生长抑制率;(4)甲基化特异性聚合酶链反应(methyl-ation specific PCR,MSP)法检测干预前后骨肉瘤Saos-2
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目的:研究姜黄素联合5-Aza-CdR是否能增强对骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化作用。方法:(1)单独或联合使用不同质量浓度的姜黄素与5-Aza-CdR作用于骨肉瘤细胞;(2)观察细胞的生长情况和形态变化(采用倒置相差显微镜);(3)CCK-8法检测细胞生长抑制率;(4)甲基化特异性聚合酶链反应(methyl-ation specific PCR,MSP)法检测干预前后骨肉瘤Saos-2细胞PTEN基因和P16基因的甲基化状态;(5)RT-PCR检测相关基因P16,PTEN的表达情况;(6)western blot检测P16,PTEN蛋白水平的表达情况。结果:(1)姜黄素和5-Aza-CdR均呈现出以时间和浓度梯度依赖性的关系抑制骨肉瘤细胞的生长。(2)MSP法检测结果提示姜黄素与5-Aza-CdR单独及联合使用均有一定的去甲基化作用,二者联合使用时去甲基化作用比单独作用时效果明显增强。(3)与空白对照组相比,RT-PCR和western blot结果提示姜黄素与5-Aza-CdR联合使用时,P16,PTEN的基因、蛋白表达水平均增高(P<0.05)。结论:(1)姜黄素、5-Aza-CdR均能抑制人骨肉瘤Saos-2细胞的增殖及诱导其发生凋亡;(2)姜黄素、5-Aza-CdR均可增强人骨肉瘤Saos-2细胞抑癌基因P16,PTEN的去甲基化水平;(3)姜黄素联合5-Aza-CdR作用于人骨肉瘤Saos-2细胞可增强人骨肉瘤抑癌基因P16,PTEN的去甲基化水平,较单独作用时的效果明显。
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