论文部分内容阅读
第一部分心脏移植模型的建立和移植物局部淋巴细胞miR-155表达分析目的：建立稳定有效的小鼠腹部心脏移植模型。明确miR-155在移植物局部淋巴细胞的表达变化。方法：1：以C57BL/6小鼠为受体,Balb/c小鼠心脏作为供体,建立小鼠心脏移植急性反应模型：以C57BL/6小鼠为受体,Bm12小鼠心脏作为供体,建立小鼠心脏移植慢性排斥反应模型：观察两组移植物心脏的生存时间。2：在心脏急性排斥反应移植后7天/慢性排斥反应后60天,观察移植物心脏排斥反应病理变化。3：分离移植物心脏局部淋巴细胞,qPCR检测miR-155表达水平。结果：1：在心脏移植急性/慢性排斥反应模型中,同种异型移植组供心平均存活时间为(7.5±0.37)/(63.4±4.37)天；2：与同系移植组相比,两种同种异型移植组移植物心肌组织内均有不同程度炎症细胞浸润,伴明显心肌细胞变性坏死,心肌问质纤维化。3：移植物中局部淋巴细胞的miR155明显升高。结论：本实验模型能较好的反应急性/慢性排斥反应的病理变化,达到模型建立标准,可以用于本课题移植免疫的研究。移植物局部淋巴细胞的miR-155表达明显升高,可能对移植物排斥反应有调节作用。第二部分m i R-155在心脏急性排斥反应中的作用及机制研究目的：探讨miR-155在心脏移植急性排斥反应中的作用和机制。方法：1：建立心脏移植急性排斥反应模型,测定心脏移植物存活时间和组织局部的细胞因子表达变化,并对移植物局部组织进行病理染色。流式分析脾脏细胞的T细胞亚群变化。2：对建模成功的miR-155-/-小鼠进行rIL-17A干预,并进行病理分析及局部细胞因子分析。3：分离miR155-/-和/或miRl 55+/+CD4+脾细胞,过继输入Rag1-/-小鼠体内,然后行心脏移植手术,观察不同小组移植物排斥反应程度,以及Th17比例变化。结果：miR-155-/-组移植物存活时问延长,心肌细胞炎症细胞细胞浸润明显减轻,伴随着细胞因子IL-17A明显减少。重组细胞因子IL-17A能够逆转这种保护作用。细胞过继进一步证实miR155-/-小鼠的保护作用是通过Th17细胞免疫反应来实现的,并证实miR155敲除后的Th17细胞表型稳定性明显减弱。结论：敲除miR155可能通过减弱Th17免疫效应来缓解心脏移植物急性排斥反应第三部分miR-155在心脏慢性排斥反应中的作用及机制研究目的：探讨miR-155在心脏移植急性排斥反应中的作用和机制。方法：1：建立心脏移植急性排斥反应模型,测定心脏移植物存活时间和组织局部的细胞因子表达变化,并对移植物局部组织进行病理染色。流式分析脾脏细胞的T细胞亚群变化。2：对建模成功的miR-155-/-小鼠进行rIL-17A干预,并进行病理分析及局部细胞因子分析。3：体外应用miR-155+/+或者miR-155-/-CD4+T细胞,进行Th1/Th17/Treg诱导,流式检测IFN-yγ、IL-17A和Foxp3表达。并对miR-155相关靶基因进行检测。结果：miR-155-/-组移植物存活时间延长,移植物血管病变及炎症细胞浸润明显减轻,伴随着细胞因子IFN-y/IL-17A明显减少。重组细胞因子IL-17A能够逆转这种保护作用。体外Th17细胞诱导实验证实,miR-155缺失可以明显减弱IL-17A表达。这种作用可能通过c-Maf或SOCS1来实现的。结论：敲除miR155也可以通过调节Th1/Th17免疫反应来缓解慢性移植物排斥反应.