VE-cadherin重组腺病毒偶联氧化型甘露聚糖抗肿瘤实验研究

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目的:以血管为靶向的抗血管治疗已成为目前抗肿瘤治疗的一种新策略。VE-cadherin(Vascular endothelial-cadherin,血管内皮钙粘附素)是内皮细胞特异性粘附分子,对其正常生理具有重要作用,抑制VE-cadherin可作为抗肿瘤新生血管形成的治疗手段。树突状细胞(DC)是机体强有力的抗原递呈细胞(APC),细胞表面高表达甘露糖受体(MR),能介导高效的抗原识别与摄取作用。本研究拟通过制备重组鼠VE-cadherin腺病毒,经氧化型甘露聚糖修饰,观察在小鼠肿瘤模型中抗肿瘤血管免疫效应并进行初步分析。 方法:从小鼠胚胎提取总RNA,RT-PCR扩增小鼠VE-cadherin全长cDNA基因。经T-A克隆并作酶切鉴定和测序确认,进一步酶切将目的基因连接到穿梭质粒载体。酶切鉴定后与病毒骨架质粒在电击下共转化,发生同源重组形成重组腺病毒质粒。经过鉴定,转染包装,筛选,扩增,纯化,制备高滴度重组病毒。在体外经氧化型甘露聚糖修饰(简称AdVEC-m)后腹腔注射免疫小鼠。观察AdVEC-m对小鼠LLC,CT26肿瘤的保护或治疗效应以及抗转移效应;对肿瘤组织切片内微血管作CD31免疫组化染色;利用藻酸盐包裹肿瘤细胞实验观察对小鼠体内肿瘤血管生成抑制情况;通过ELISA、Western blot检测抗体对抗原的识别能力;51Cr释放法检测脾T细胞及抗体对内皮细胞的特异杀伤活性;同时T细胞亚群阻断实验观察不同T细胞亚群在抗肿瘤效应中的作用。
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