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研究目的本研究选用苯甲酸雌二醇和缩宫素制作类痛经大鼠模型,全身冷冻法制备寒凝证模型,二者结合制成寒凝证类痛经大鼠模型。选用三阴交穴,采用两种不同针刺方法分为两组进行治疗:刺激量A组(期望“得气”组)采用粗针、深刺、行平补平泻手法,刺激量B组(期望“不得气”组)用细针、浅刺、不行手法,测定治疗前后子宫收缩强度,以红外热像技术测定三阴交和血海穴区的左右侧温度变化,检测子宫和脊髓的κ-受体和μ-受体以及海马NMDA受体的表达,评价不同的针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠模型的镇痛效应是否存在差异,探讨“得气”的客观评价指标其神经生物学机制,为“得气”对经穴特异性的影响因素研究提供实验数据。研究方法按随机数字表法将96只雌性SD大鼠,随机分为4组,每组24只,分别为:盐水组、寒凝证类痛经模型组、刺激量A组(期望“得气”组)、刺激量B组(期望“不得气”组)。除盐水组外均给予大鼠注射苯甲酸雌二醇和缩宫素2U/只,并于第1天至第5天放入-25℃冰柜冷冻,制备寒凝证类痛经大鼠模型;盐水组每日给予同等剂量的生理盐水。第10天注射缩宫素后,刺激量A组(期望“得气”组)和刺激量B组(期望“不得气”组)以不同刺激量进行针刺治疗。记录子宫收缩波个数、峰峰值及子宫活动度;以红外热像技术测定三阴交和血海穴区的左右侧的基础温度和治疗后60分钟内的左右侧温度;以RealTime-PCR法测定子宫和脊髓的κ-受体和μ-受体以及海马NMDA受体的表达。研究结果1不同针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠模型的子宫收缩强度的影响与盐水组相比,模型组子宫收缩波个数明显增加(P<0.01),子宫收缩波峰峰值显著升高(P<0.01),子宫活动度显著增加(P<0.01);与寒凝证类痛经模型组比较,刺激量A组(期望“得气”组)显著减少了子宫收缩波个数(P<0.01)并降低了子宫活动度(P<0.05);与刺激量A组(期望“得气”组)比较,刺激量B组(期望“不得气”组)的子宫收缩波个数明显增多(P<0.05)。2不同针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠模型的左右三阴交和血海穴区温度的影响寒凝证类痛经模型大鼠三阴交穴区的左右体表温度失衡,刺激量A组(期望“得气”组)(粗针、深刺、行平补平泻手法)可显著调节大鼠三阴交穴区左右温度失衡的状态,且调节需要一定的时间过程,针刺后20-40min调节作用较为显著。刺激量B组(期望“不得气”组)(细针、浅刺、不行手法)无明显改变。寒凝证类痛经模型大鼠血海穴区的左右温度在各个时间点均未见明显异常。3不同针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠模型的子宫和脊髓阿片受体表达的影响与模型组相比,子宫μ受体的表达明显升高(刺激量A组(期望“得气”组)P<0.01,刺激量B组(期望“不得气”组)P<0.05)。各组间子宫κ受体、脊髓μ受体与κ受体的表达均无明显差异。4不同针刺刺激量对寒凝证类痛经大鼠模型的海马NMDA受体表达的影响各组间海马NMDA受体NR1亚型的表达均无明显差异。研究结论:1寒凝证类痛经大鼠表现为子宫痉挛收缩状态,刺激量A组(期望“得气”组)可明显缓解子宫痉挛状态,刺激量B组(期望“不得气”组)未见此效应,提示刺激量A组针刺效应强于B组。2红外热成像结果表明,寒凝证类痛经模型大鼠三阴交穴区左右体表温度失衡;针刺强刺激介入后,可调节大鼠三阴交穴区左右温度失衡的状态,该变化需要一定的时间过程,针刺20-40min后调节作用较为显著。而较小的刺激量介入未见明显改变。根据中医理论“气至而有效”论述认为刺激量A组(期望“得气”组)的模型动物处于较强“得气”状态。3中枢与外周阿片受体基因表达的结果显示,刺激量A组(期望“得气”组)可调节外周子宫组织μ受体的表达,提示得气状态下针刺效应的机制之一可能是通过调节靶器官μ受体的表达而实现的。而中枢μ、κ及NMDA受体基因表达未见明显改变,可能与动物受到寒冷刺激后机体内环境神经-内分泌-免疫系统的功能紊乱有关,其深入机制尚需进一步研究揭示。