一、非小细胞肺癌中B7-H3和FOXP3的组织水平研究及其临床分析目的：通过检测非小细胞肺癌组织中B7-H3和FOXP3的表达情况,探讨它们之间表达的相关性及其与非小细胞肺癌临床病理参数及患者预后的关系,为非小细胞肺癌的诊断和评价预后提供一定的理论依据。材料与方法：收集资料完整的非小细胞肺癌石蜡标本110例,应用免疫组织化学法(SP法)检测B7-H3和FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达情况,分析B7-H3和FOXP3表达与非小细胞肺癌临床病理参数的关系,探究B7-H3和FOXP3之间表达的相关性及其与患者预后的关系。免疫组织化学法数据采用x2检验和双侧t分布检验,生存分析采用Log-rank时序检验和Kaplan-Meier生存曲线。所有统计学结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果1.B7-H3在非小细胞肺癌组织中的表达与患者年龄、吸烟指数、肿块大小和淋巴结有无转移无关,差异无统计学意义(P>0.05)；B7-H3在非小细胞肺癌组织中的表达与患者性别有关,差异有统计学意义(P<0.05),B7-H3在成年男性非小细胞肺癌中的阳性表达率明显高于女性。B7-H3在非小细胞肺癌组织中的表达与肺癌的病理学类型有关,差异有显著的统计学意义(P<0.01),B7-H3在肺鳞癌组织中的阳性表达率要高于在腺癌组织中的表达率。B7-H3在非小细胞肺癌组织中的表达与肿瘤TNM分期有关,差异有统计学意义(P<0.05),B7-H3在非小细胞肺癌TNM Ⅱ-Ⅲ期组组织中的表达高于TNM I期组。2. FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达与患者吸烟指数、病理学类型和肿块大小无关,差异无统计学意义(P>0.05)。FOXP3在非小细胞肺癌中的表达与患者年龄有关,差异有显著的统计学意义(P<0.01),FOXP3在≥60岁年龄组的表达率要高于<60岁组。FOXP3在非小细胞肺癌中的表达与患者性别及区域淋巴结转移情况有关,差异有统计学意义(P<0.05),FOXP3在成年男性患者中的阳性表达率明显高于女性,有区域淋巴结转移患者中的阳性表达率高于无区域淋巴结转移组。FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达与肿瘤TNM分期有关,差异有统计学意义(P<0.05),FOXP3阳性表达率在TNMⅡ-Ⅲ期组明显要高于TNM I期组。3.B7-H3和FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达成正相关性(P<0.05)4.B7-H3在非小细胞肺癌组织中的表达强度与肿瘤浸润淋巴细胞中FOXP3+Treg细胞数量成正相关性(P<0.05)。5.B7-H3和FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达强度越高,患者总生存期越短和预后越差。结论1.B3-H7和FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达上调。2.B3-H7在非小细胞肺癌组织中的表达与患者年龄、吸烟指数、肿瘤大小、淋巴结是否转移无关,而与患者性别、病理学类型、肿瘤TNM分期相关。FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达与患者吸烟指数、组织学类型、肿瘤大小无关,而与患者年龄、性别、区域淋巴结转移情况、肿瘤TNM分期相关。3.B7-H3和FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达成正相关性。4.B7-H3在非小细胞肺癌组织中的表达强度与肿瘤浸润淋巴细胞中FOXP3+Treg细胞数量成正相关性。5.B7-H3和FOXP3在非小细胞肺癌组织中的表达强度越高,患者总生存期越短和预后越差。5.首次分析并阐释了B7-H3和FOXP3在NSCLC组织中表达的相关性,及其在NSCLC患者预后中的重要性。二、免疫相关细胞因子在非小细胞肺癌患者血清中的表达及意义目的：前文研究中发现B7-H3参与了非小细胞肺癌中T淋巴细胞的调节过程,而白细胞介素广泛参与了T淋巴细胞的调节,为进一步验证白细胞介素在非小细胞肺癌发生转移中的作用及其与患者预后的相关性,本部分研究选取近年来发现的且在非小细胞肺癌中研究较少的IL-24和IL-36为代表,通过酶联免疫吸附法进一步研究它们在非小细胞肺癌患者血清中的表达情况,并探讨它们的变化规律与非小细胞肺癌临床分期的关系,为非小细胞肺癌的诊断和评价预后提供一定的理论依据。材料与方法：分别收集41例原发性非小细胞肺癌患者和10例健康对照者的血清样本。应用酶联免疫吸附法(ELISA)对血清中IL-24、IL-36含量进行测定。41例原发性非小细胞肺癌患者按性别、肿瘤TNM分期与10例健康对照者比较分析。统计学结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果1. NSCLC患者外周血清中IL-24含量远高于对照组,组间差异较为显著(p<0.01)。NSCLC患者外周血清IL-36含量要高于对照组,组间存在差异(p<0.05)。2. NSCLC男性患者外周血清中IL-24含量接近于女性患者,组间水平不存在差异(p>0.05)。NSCLC男性患者外周血清中IL-24含量高于对照组,组间存在显著差异(p<0.01)。NSCLC女性患者外周血清中IL-24含量高于对照组,组间存在显著差异(p<0.01)。NSCLC男性患者外周血清中IL-36含量与女性患者IL-36含量相接近,组间差异不明显(p>0.05)。NSCLC男性患者外周血清中IL-36含量高于对照组,组间存在差异(p<0.05)NSCLC女性患者外周血清中IL-36含量高于对照组,组间存在差异(p<0.05)3.IL-24含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要高于Ⅱ-Ⅲ期患者,组间存在差异(p<0.05)。IL-24含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要远高于对照组,组间存在显著差异(p<0.01)。IL-24含量在NSCLC Ⅱ-Ⅲ患者外周血清中含量要远高于对照组,组间存在显著差异(p<0.01)。IL-36含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要低于Ⅱ-Ⅲ期患者,组间存在差异(p<0.05)。IL-36含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要高于对照组,组间差异不明显(p>0.05)。IL-36含量在NSCLC Ⅱ-Ⅲ期患者外周血清中含量要高于对照组,组间存在显著差异(p<0.01)。结论1. IL-24、IL-36在非小细胞肺癌患者外周血清中的含量均高于对照组。2.IL-24表达的变化规律：NSCLC>对照组；Ⅰ期>Ⅱ-Ⅲ期>对照组。IL-36表达的变化规律：NSCLC>对照组；Ⅱ-Ⅲ期>Ⅰ期>对照组3.首次分析了IL-24、IL-36在NSCLC患者外周血清中的表达情况,并初步探讨其与非小细胞肺癌发展转移的相关性。4.据本实验结果推测,在NSCLC患者中,B7-H3的表达强度与IL-36的表达水平间可能存在着某种正相关的关系性,而B7-H3的表达强度与IL-24的表达水平间可能存住着某种负相关的关系。三、非小细胞肺癌转移相关基因的验证目的：为进一步研究B7-H3在非小细胞肺痛肿瘤转移过程中的作用,本实验检测了多个参与肿瘤转移及免疫逃逸相关因子在DNA转录表达水平上与B7-H3的关系,从而进一步验证了B7-H3在非小细胞肺癌转移过程中的重要性。材料与方法：以10例非小细胞肺癌患者切除的肿瘤组织为实验组,相对应癌旁组织为对照组,分别提取其RNA,进行反转录之后,通过real-time PCR的方法检测其中与肿瘤转移及免疫逃逸相关因子TLR3、TRAK1、EGFR和TCF12的转录表达水平,并与B7-H3的表达水平进行相关性分析,统计学结果采用SPSS 19.0软件进行统计分析。结果1. NSCLC患者肿瘤组织中B7-H3基因表达水平要高于癌旁组织的对照组,组间表达水平差异明显(p<0.05),而NSCLC患者肿瘤组织中TLR3基因表达水平与对照组癌旁组织的表达水平相接近,组间表达水平差异不明显(p>0.05)在NSCLC肿瘤组织和癌旁组织中,B7-H3基因与TLR3基因的表达关系不具有相关性。2. NSCLC患者肿瘤组织中TRAK1基因表达水平要高于癌旁组织的对照组的表达水平,组间表达水平差异明显(p<0.05)在癌旁组织中,B7-H3基因与TRAKl基因的表达关系不具有相关性,而在NSCLC肿瘤组织中,B7-H3基因与TRAK1基因的表达关系可能存在一定的正相关性。3. NSCLC患者肿瘤组织中EGFR基因的表达水平要高于对照组癌旁组织的表达水平,组间表达水平差异明显(p<0.05)在癌旁组织中,B7-H3基因与EGFR基因的表达关系不具有相关性,而在NSCLC肿瘤组织中,B7-H3基因与EGFR基因的表达关系可能存在一定的正相关性.4. NSCLC患者肿瘤组织中TCF12基因表达水平与对照组癌旁组织的表达水平相接近,组间表达水平差异不明显(p>0.05)。在NSCLC肿瘤组织和癌旁组织中,B7-H3基因与TCF12基因的表达关系都不具有明显的相关性。结论1. B7-H3. TRAK1、EGFR基因在NSCLC肿瘤组织中表达水平均高于对照组癌旁组织,而TLR3、TCF12基因表达水平在NSCLC肿瘤组织和癌旁组织间无明显差异。2.本实验对非小细胞肺癌转移相关基因进行了验证,首次验证出在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中,TARK1和EGFR的表达有显著差异,而TLR3和TCF12不具有显著差异,结果提示B7-H3基因与TRAK1、EGFR基因的表达可能存在某种相互的关系。3.基于本实验中B7-H3、TRAK1、EGFR基因表达特点的相似性以及B7-H3和FOXP3共同促进肿瘤转移,我们是否可以推测,在NSCLC患者肿瘤的发生、发展过程中,B7-H3与TRAK1、EGFR的信号通道或调控途径中可能存在着某种未知的诱导或协作效应,共同促进肿瘤转移。综合以上部分可以得出,在非小细胞肺癌中B3-H7和FOXP3的表达上调共同促进肿瘤转移,但这种上调可能受多种因素影响；在非小细胞癌患者外周血清中IL-24和IL-36的表达也都出现上调,其中IL-24在I期的表达要高于Ⅱ-Ⅲ期,IL-36则在Ⅱ-Ⅲ期中表达更高,说明IL-24和IL-36在NSCLC肿瘤发展中发挥着不同的作用；通过real-time PCR对非小细胞肺癌转移相关基因进行了检测,结果表明TARK1和EGFR基因的表达有显著差异,而TLR3和TCF12基因不具有显著差异,结果提示B7-H3基因与TRAK1、EGFR基因的表达可能存在某种相互的关系,在NSCLC肿瘤的转移和发展过程中可能存在某种协作关系。