弓形杆菌及弯曲菌的检测研究

来源 :中国疾病预防控制中心 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xynady
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食源性病原菌的感染给人类带来巨大的疾病负担。弓形杆菌(Arcobater)被认为是人类新发的食源性病原菌,其属内的布氏弓形杆菌(A.butzleri)嗜低温弓形杆菌(A.cryaeraphilus)和斯氏弓形杆菌(A.skirrowii)已证实可导致人类和动物的腹泻、菌血症等疾病。污染的食品或水是弓形杆菌传播的主要途径。国外研究报道显示肉类食品中鸡肉的弓形杆菌污染率较高,且对环丙沙星等一线临床治疗药物高度耐药。但目前我国弓形杆菌污染情况的相关报道较少,对其流行及病原学的研究仍缺乏基础数据。为了解我国零售鸡肉中弓形杆菌的污染现状及耐药特征,本研究对78份鸡肉标本进行分离培养,结果显示本地区鸡肉中弓形杆菌检出率高达76.92%,其中以嗜低温弓形杆菌为主(78.67%),其次是布氏弓形杆菌(20.00%)和斯氏弓形杆菌(1.33%)。研究显示本地区弓形杆菌的污染和菌种分布情况与国外有较大差别。75株分离株(包括59株嗜低温弓形杆菌、15株布氏弓形杆菌、1株斯氏弓形杆菌)的6种抗生素敏感性检测结果显示分离株对环丙沙星耐药率最高(41.33%)。嗜低温弓形杆菌和布氏弓形杆菌在耐药特征上存在显著差异,嗜低温弓形杆菌对环丙沙星耐药率最高(47.46%),而布氏弓形杆菌对氯霉素耐药率最高(86.67%)。多位点序列分型(Multi Locus Sequence Typing,MLST)方法在食源性病原菌的暴发识别、遗传进化及溯源分析中已经广泛应用。为了解本地区弓形杆菌分离株的遗传特征及国内外菌株的遗传差异,本研究使用MLST方法对国内外菌株进行分析,结果显示本地区75株分离株分为62个ST型,230个位点和61个ST型首次发现。系统发生树显示嗜低温弓形杆菌、布氏弓形杆菌和斯氏弓形杆菌可呈明显分支。最小生成树分析显示弓形杆菌属内不同菌种间有多个共同的基因位点,提示管家基因可能在种间存在转移和重组,最小生成树、eBURST、系统进化树分析没有发现分离株存在地区、宿主来源的相关的聚集性。为进一步了解弓形杆菌的遗传特征,对本研究分离的1株布氏弓形杆菌和1株斯氏弓形杆菌(ICDCAS19)进行全基因测序并与Genbank数据库中其他国家的弓形杆菌进行比较基因组分析,结果显示弓形杆菌存在着较多的基因突变和水平转移,系统发生树显示宿主来源存在一定程度上的聚集。弯曲菌是主要的食源性病原菌,其感染导致的疾病称为弯曲菌病。弯曲菌的感染可导致急性胃肠炎,其中空肠弯曲菌可能会引发后遗症格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS),造成严重的疾病负担。空肠弯曲菌是最常见的是弯曲菌种,也是引起细菌性胃肠炎的首要病因。因此,建立一个快速、灵敏度高、特异性强的空肠弯曲菌检测方法具有十分重要的临床意义。多重交叉置换扩增技术(Multiple cross displacement amplification,MCDA)是在环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的原理上建立的一种更简单、快速、准确的恒温核酸检测技术。本研究以MCDA扩增原理为基础建立了空肠弯曲菌的MCDA鉴定技术,可快速、准确的鉴别空肠弯曲菌,反应过程无需热循环装置,加入可视染料后可直接肉眼观察检测结果,对临床和现场空肠弯曲菌感染的诊断具有重要意义。研究发现空肠弯曲菌可在健康人群中携带,携带率在0.6%~9.4%之间。通常分离培养法是弯曲菌感染诊断的标准,但对于使用抗生素治疗后的患者和格林-巴利综合征患者,由于其体内带菌量较低,使用传统的分离培养法检测灵敏度降低。因此,血清学检测可作为弯曲菌感染的辅助诊断方法。为了解我国健康人群中的弯曲菌携带情况及其空肠弯曲菌抗体的基线水平,本研究使用分离培养、多重PCR和血清学检测三种方法对125份河北地区健康职业体检人群肛拭子标本进行初步筛查,结果显示分离培养法空肠弯曲菌检出率为0.8%,多重PCR弯曲菌检出率为40%。PCR扩增产物测序结果显示共检出5 个弯曲菌种-C.hominis,C.ureolyticus,C.rectus,C.concisus,C showae,提示弯曲菌属的其他菌种在人群中可能广泛分布。空肠弯曲菌血清学检测结果显示IgG和IgM 阳性率分别为0.9%和19.80%。研究发现空肠弯曲菌携带者血清抗体水平没有显著增高。
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