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目的:调查河南省封丘县忍冬枝枯现象原因,明确其对药材金银花产量和质量的影响。
方法:田间调查忍冬枝枯现象的发生规律及特点;组织分离法分得不同地区病株中的共有真菌并进行回接,验证其致病性;结合形态学特征鉴定法、rDNA-ITS序列鉴定法、TEF-1α基因部分序列鉴定法,确定病原菌分类学地位;对部分致病菌生物学特性进行考察,研究不同温度、pH、光照、碳氮源等条件对病原菌生长和产孢的影响;利用田间调查法和高效液相色谱法确定忍冬枝枯病对药材金银花产量和质量的影响。
结果:
1 忍冬枝枯现象发生特点
忍冬枝枯现象在忍冬整个生育期均可发生,7 -9月为该病高发期,发病部位常为成年忍冬枝条或扦插幼苗整株。随病情发生和发展,病枝叶片逐步呈现黄化、边缘枯萎、脱落现象,并从发病点沿枝条蔓延,导致枝枯。在高温高湿条件下,病叶落叶痕或病枝剪口处常可见白色溢出状菌丝。挖出重病植株,偶可见根部发黑,须根稀少。该病传播迅速,可在不同枝条或不同植株间传播,也可经由忍冬扦插苗传播。
2 忍冬枝枯病原菌的分离回接
分别用PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基和WA(水琼脂)培养基从河南省封丘县三个忍冬枝枯病高发区分离出共有真菌5种,其中PDA培养基中分离出的4种病原菌可以纯化,分别命名为 FQ1、FQ2(来自病株茎、叶),FQ3、FQ4(来自病株根部);WA培养基中分离出的一种真菌来自忍冬病枝活体,命名为FQ0,不能培养。将PDA培养基上分得的4种真菌进行回接验证,证明其均可致病。
3 五种真菌的鉴定
综合利用形态特征鉴定、显微特鉴定、rDNA-ITS序列分析及TEF-1α基因部分序列分析等方法确定 5 种真菌的分类学地位,将菌株 FQ1 和 FQ2 鉴定为(Fusarium incarnatum - equiseti species complex),将菌株FQ3、FQ4鉴定为( Fusarium solani species complex ),将 FQ0 鉴定为( Thanatephorus theobromae)。
4 四株镰刀菌的生物学特性
研究了四株镰刀菌 FQ1、FQ2、FQ3、FQ4 在不同温度、pH、光照及碳氮源条件下的生长和产孢情况。结果显示,菌株 FQ1,最适菌丝生长温度为 25℃,最适产孢温度为 30℃,最适菌丝生长 pH 值为 6-10,最适产孢 pH 值为 8,光照条件对菌丝生长无显著影响,全黑暗条件有利于产孢,菌丝生长最佳碳氮源分别为淀粉、蔗糖和硝酸钠,产孢最佳碳氮源分别为山梨醇和硝酸钠;菌株 FQ2,最适菌丝生长温度为 30℃,最适产孢温度为35℃,最适菌丝生长pH值为10,最适产孢p H值为7和 11 ,全黑暗条件有利于菌丝生长和产孢,菌丝生长最佳碳氮源分别为蔗糖和酵母、硝酸钠,产孢最佳碳氮源分别为果糖和硝酸钠;菌株FQ3,最适菌丝生长温度为 30℃,最适产孢温度为35℃,最适菌丝生长pH值为 9,最适产孢 pH 值为 7 和 10,全黑暗条件有利于菌丝生长和产孢,菌丝生长最佳碳氮源分别为乳糖和甘氨酸,产孢最佳碳氮源分别为葡萄糖和硝酸钠;菌株 FQ4,最适菌丝生长温度为 25℃-30℃,最适产孢温度为 30℃,最适菌丝生长pH值为5-10,最适产孢pH值为9,半光照条件有利于菌丝生长和产孢,菌丝生长最佳碳氮源分别为蔗糖和酵母,产孢最佳碳氮源分别为果糖和酵母。
5 田间结蕾量调查证明忍冬枝枯现象能导致田间金银花结蕾量显著减少;高效液相分析结果表明,枝枯植株所得金银花药材中绿原酸和木犀草苷含量普遍高于健康植株;病株叶片中绿原酸含量亦高于健康植株。
结论:发生在封丘县的忍冬枝枯现象是由多种病原菌侵染引起的致病现象。病原菌对环境适应范围宽,侵染途径各有不同,在田间造成了多种发病症状。忍冬枝枯现象可严重降低金银花产量,但病株中绿原酸、木犀草苷含量高于健康植株。