清营口服液的研制及在鸡E.coli和IBV疫病防治中的应用研究

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中医中药是中华文化传统瑰宝,在防治动物疾病、提高动物生产性能、改善产品品质等方面也发挥了巨大的作用。中医与靶向治疗的西医不同,其将动物机体作为一个整体,采取辨证施治,既不易产生耐药性又具有调节机体免疫力的功能,在畜禽疾病防治中具有很大优势。伴随现代家禽养殖集约化发展,密闭的养殖环境造成临床呼吸道疾病多发,临床上引起呼吸道疾病多有传染性支气管炎病毒IBV感染,且多见继发或并发大肠杆菌E.coli感染,引起机体出现发热,同时出现菌血症和毒血症的全身感染。清营汤为传统治疗温病的经典方剂,该方出自清代著名温病学家吴鞠通的《温病条辨》,由犀角、黄连、玄参、竹叶、双花、麦冬、生地、丹参、连翘九味药组成,具有清营养阴、透热转气、清心安神及活血化瘀的功效,对传染性支气管炎病毒感染,及继发或并发大肠杆菌疾病有一定疗效,但由于其含有珍稀药材,不便在畜禽疫病中广泛应用,本研究在君臣佐使中药配伍理论指导下对古方进行优化调整,得到新方剂清营口服液。  清营口服液组方为:黄连、金银花、连翘、黄芩、竹叶和冰片等。此方以黄连、黄芩清营分热,银花、连翘去气分热,冰片芳香开窍,率领诸药,以对气分和营分热证。在确定组方的基础上对生产工艺和质量标准进行研究,通过方法学考察,最终确定生产工艺参数为:加水量8倍,0.5h浸泡,提取0.5h,3次提取。另外,本研究还制定了清营口服液的质量标准。性状检测结果表明本品为棕黑色液体,微苦,久置有少许沉淀;标志物鉴别结果表明薄层法应能检测到黄连、金银花、连翘、黄芩四味中药的有效成分,分别为小檗碱、绿原酸、连翘苷和黄芩苷;高效液相色谱法检测小檗碱含量不低于0.7mg/ml,绿原酸含量不低于0.8mg/ml。  清营口服液毒理学研究表明,小鼠以0.2ml/10g b.w.剂量灌胃给药无急性毒性,wistar大鼠以40g/kg b.w.(高)、20g/kg b.w.(中)、10g/kg b.w.(低)剂量灌胃给药30d无亚急性毒性,靶动物鸡以5ml/kg b.w(高)、3ml/kg b.w(中)、1ml/kg b.w(低)灌胃给药5d不会对鸡造成损伤。  清营口服液药效学研究表明,清营口服液具有良好的抗病毒作用,可以显著提高传染性支气管炎病毒感染鸡胚的存活率,约10%(P<0.05),对鸡人工感染传染性支气管炎病毒有治疗效果。另外,清营口服液有良好的抑菌作用。1g/ml清营口服液体外抑菌试验显示对大肠杆菌经典株C84008株的抑菌圈为18.50mm,对鸡人工感染大肠杆菌有抑制效果。对鸡自然感染大肠杆菌与传染性支气管炎病毒的疾病有治疗效果,说明新方剂清营口服液具有良好的临床效果。在以上工作基础上,完成新兽药的申报,获得国家三类新药证书,并将该成果进行转化。  为了更好的促进该药在临床的推广应用,研究清营口服液在体内的吸收和代谢规律,以清营口服液组分黄连的主要标志物小檗碱为考察指标,对比甲磺酸培氟沙星,以SPF鸡为实验动物,进行药动学研究。研究发现小檗碱与甲磺酸培氟沙星都具有在鸡体内吸收迅速的特点,小檗碱在鸡体内达到高峰浓度时间为2.38h,48h能够代谢完,这从药动学角度解释了清营口服液起效快的机制,同时也为清营口服液的正确临床使用提供了指导。
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