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本文对我国著名的四大怀药之一——怀山药的组织培养及其产业化过程中的茎尖脱毒、快速繁殖、壮苗生根、驯化移栽等关键技术环节进行了详细的研究。研究结果表明:
1.首次发现感染怀山药的病毒为马铃薯Y病毒和马铃薯卷叶病毒,它们是造成怀山药产量下降、品质退化的主要原因;
2.茎尖培养时,获得较高的成活率和脱毒率的培养基以6-BA2(单位mg/L,以下同)+NAA0.2为宜,茎尖大小以0.3~0.5mm为宜,热处理温度以37±2℃为宜;
3.适宜试管苗快速繁殖的培养基为MS+KT2+NAA0.02,在大塑料瓶中进行液体静置培养时繁殖系数可达8左右,其增殖倍数是固体培养基的187%;相同条件下,其增殖倍数比三角玻璃瓶高1.8倍;
4.怀山药不同基因型的材料离体保存时,PP333使用的最佳浓度各不相同,47号山药为3mg/L,铁棍山药为8mg/L,二者的保存时间均能达到6个月;保存后的试管苗能很快恢复正常生长;
5.适宜浓度(0.5~1mg/L)的PP333可以促进试管苗生长,使苗生长健壮,叶色浓绿,根系发达,根冠比增大,试管苗的素质提高,达到了培育壮苗的目的;经PP333处理后试管苗叶片的叶绿素、可溶性糖和可溶性蛋白含量增加,NR、POD和IAA氧化酶活性升高,并且其生理变化与形态变化相一致;
6.经过PP333处理的试管苗移栽成活率明显提高(可达98%);怀山药试管苗移栽时,前5天必须保湿;移栽基质以灭过菌的珍珠岩为最好;
7.怀山药的脱毒苗在大田种植后生长情况良好,增产40%,但在不同土壤质地中增产不同,沙壤土增产效果较二合土显著。
本研究结果为解决怀山药生产中存在的病毒感染严重,产量下降、品质退化、优良品种繁殖速度慢等问题和怀山药组织培养中存在的试管苗细弱,移栽成活率低以及试管苗的离体保存等问题提供了一条有效的途径,同时也为怀山药脱毒苗的产业化生产奠定了基础。