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目的:探讨氧化损伤在燃煤型地方性氟中毒发生发展中的作用,为贵州地区地方性氟中毒防治提供一定的理论支持。
方法:按照历史资料和国家标准,对贵州省毕节地区历史氟病区进行流行病学调查,并从织金县、金沙县获得氟中毒轻重病例共计121例,从毕节市周边农村获得正常对照23例,搜集上述样本的血清和EDTA-K<,2>抗凝全血。玉米和辣椒氟含量检测参照《食品中氟的测定方法(GB/T5009.18-1996)》;饮水氟含量检测参照《地方性氟中毒病区饮水氟化物的测定方法(WS/T106-1999)》;煤及土壤中总氟测定参照《燃烧水解-离子选择电极法(WS/T88-1996)》:空气氟含量检测参照《环境空气氟化物质量浓度的测定:滤膜一氟离子选择电极法(GB/T 15434-1995)》:尿氟含量检测参照《尿中氟化物测定。离子选择电极法标准(WS/T 89-1996)》;采用氧化指标专用测试试剂盒检测血液中的抗氧化物酶铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)的活性以及血清中氧化损伤产物丙二醛(MDA)的含量;采用原子吸收分光光度计(AAS)检测血清中与抗氧化物酶相关的微量元素Cu,Zn的含量;采用高效液相色谱法(HPLC)测定血清维生素E和维生素C的含量;采用逆转录PCR(RT-PCR)与凝胶电泳分析法检测样品Cu/Zn-SOD的mRNA相对表达情况。
结果:1、患者血液中的抗氧化物酶Cu/Zn-SOD、GSH-Px、CAT的活性与正常人比较均下降。其中血液中GSH-PX的活性,与正常组之间比较,在金沙、织金两地的氟中毒患者中下降明显(P<0.01),两地区的重病组也比轻病组下降明显(P<0.01),在金沙、织金两地轻病组之间比较,织金地区轻病组酶活性低于金沙地区,差异有统计学意义(P<0.05),在两地重病组之间比较,差异没有统计学意义。各患病组血清中Cu/Zn-SOD的活性均低于正常组(P<0.01),织金地区重病组血清中Cu/Zn-SOD的活性低于当地轻病组(P<0.01),金沙地区重病组血清中Cu/Zn-SOD的活性高于织金地区重病组(P<0.01),金沙地区重病组血清中Cu/Zn-SOD的活性低于当地轻病组(P<0.05),但在两地轻病组间比较,差异没有统计学意义。织金,金沙两地重病组红细胞中Cu/Zn-SOD的活性低于正常组(P<0.05),但在织金,金沙两地的轻、重病组以及同地区轻、重病组之间比较,差异没有统计学意义。CAT在血清中的活性各患病组与正常组间比较下降明显(P<0.01),在金沙地区、织金地区轻、重病组间比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。2、各患病组血清中脂质过氧化产物MDA的含量比正常组显著增加(P<0.01),金沙、织金地区重病组MDA含量分别高于当地轻病组(P<0.01),织金,金沙两地轻病组间比较,织金地区轻病组血清中MDA含量高于金沙地区轻病组,差异有统计学意义(P<0.05),两地重病组间比较,血清中MDA的含量差异没有统计学意义(P>0.05)。3、地方性氟中毒患者血清内的微量元素铜、锌以及维生素E、维生素C含量与正常人群相比均有所下降。铜元素在金沙、织金两地重病组血清中的含量均显著低于同地区轻病组,各患病组均显著低于正常组(P<0.01),金沙与织金轻病组间,以及两地重病组间分别比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。血清中锌元素含量分别在金沙、织金两地的不同病情患者之间比较,差异没有统计学意义(P>0.05),但是各患病组与正常组相比,血清中锌元素锌含量显著降低(P<0.01)。与正常组比较,血清锌铜比值在金沙、织金两地的重病组中升高(P<0.05),织金地区重病组锌铜比值高于轻病组(P<0.05),金沙地区轻、重病组间比较锌铜比值的差异没有统计学意义(P>0.05)。血清中维生素E含量在同地区轻、重病组间比较,差异没有统计学意义(P>0.05),与正常组间比较,两地的各患病组中维生素E含量下降(P<0.05),在两地轻病组之间和两地重病组之间比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。血清中维生素C的含量各患病组均显著低于正常组(P<0.01),金沙地区轻、重病组血清维生素C的含量分别高于织金地区相同病情组(P<0.05)。4、地氟病患者血液中,Cu/Zn-SOD的基因表达下降。两地轻、重病组同正常组间比较降低明显(P<0.05),金沙地区重病组Cu/Zn-SOD的基因表达量与轻病组比较降低明显(P<0.05),而在织金地区轻、重病组之间以及两地相同病情的患者组之间比较Cu/Zn-SOD的基因表达量差异没有统计学意义(P>0.05)。
结论:1、本实验通过对慢性燃煤型地方性氟中毒患者机体内与抗氧化能力相关的酶活性、微量元素含量指标进行检测,同时结合流行病学调查资料,证实了燃煤型地方性氟中毒患者体内同样存在氧化损伤,并与当地生活环境密切相关,为今后的燃煤型地方性氟中毒防治提供了理论依据;2、本实验首次对氟中毒患者机体内Cu/Zn-SODmRNA相对表达量进行检测,发现慢性燃煤型地方性氟中毒可以抑制Cu/Zn-SOD的mRNA的表达,减少Cu/Zn-SOD蛋白的产生,降低患者机体的抗氧化能力,提示了氟可能从分子水平抑制Cu/Zn-SOD蛋白的产生从而影响机体的抗氧化能力,为进一步从明确的量效关系上研究氟对其他抗氧化物酶基因表达的影响提供了参考。