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烟草是一种重要的经济作物,在世界上许多国家广为栽培。烟草自明朝传入我国后,历经四百多年的栽培,产生了丰富的种质资源,加上从国外引进的种质,目前我国已拥有烟草种质资源4042份,居世界领先水平。开展烟草种质资源的遗传多样性研究,将更好地促进烟草种质资源的收集、保存、鉴定、创新和有效利用。分子标记从DNA水平反映各材料之间的遗传差异,是研究生物遗传多样性的有力工具。AFLP标记具有多态性高、重复性好、可靠性高的优点,被广泛地应用于动植物的遗传多样性分析、种质鉴定、基因定位和标记辅助选择等方面。本研究采用AFLP标记技术,首先对白肋型烟草叶色性状基因进行了标记分析,在此基础上对90份烟草种质材料的遗传多样性和亲缘关系进行了研究。主要结果如下:1.通过SDS和CTAB两种DNA提取方法的比较,认为CTAB方法提取的烟草基因组DNA更适合于烟草AFLP分析的要求。2.初步建立了烟草AFLP银染分析体系。采用酶切连接一步法进行烟草基因组DNA的酶切和连接;预扩增选用E+A和M+C引物;预扩增结束后,预扩增产物稀释20倍,作为选择性扩增的模板;选择性扩增选用E+3和M+3引物;扩增结束后,每个样加入7μl的Loading Buffer,95℃变性处理5min,变性后立即冷却,置于4℃冰箱保存备用。利用6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳,后用银染法检测。银染程序为胶版的固定脱色20min左右、水洗10min、银染30min、快速漂洗不超过10s、显带6～7min、定影2～3min、水洗10min,最后室温干燥、统计记录。3.用白肋烟品种L8和正常绿色型烤烟品种大白筋599构建了一个回交分离群体(BC1),利用BSA法对白肋型烟草叶色性状基因进行AFLP标记分析,找到一个与控制白肋型叶色性状基因相连锁的AFLP标记E-CAA/M-GGC TY260。4.利用AFLP荧光标记技术,筛选出8对多态性较高的引物组合,分别是E-AAC/M-CAG,E-AAG/M-CAG,E-AAG/M-CTC,E-ACA/M-CAG,E-ACA/M-CTA,E-ACA/M-CTC,E-ACA/M-CTT,E-ACT/M-CAG。利用8对引物对烟草7种类型90份种质进行扩增分析,共扩增出1358条带,其中多态性条带1346条,平均多态性条带比率(PPB)为99.1%。5.90份烟草种质的Dice遗传相似系数在0.33-0.89之间,平均为0.66,表明烟草种质的遗传相似程度较高,亲缘关系较近。UPGMA聚类显示,在0.554的相似水平下,