目的:糖尿病(DM)是一组病因和发病机理尚未完全阐明的内分泌代谢疾病,以高血糖为其共同标志,其慢性并发症是DM患者致死、致残的主要原因。与糖尿病抗争的一个重要环节是实时监测血液中的葡萄糖浓度。研究显示,对糖尿病患者,每天监测血糖应在4—7次,即使是最简便的家用血糖监测方法,也需针刺采血,虽然是“微创”,但还是给患者带来严重的生理痛苦和心理压力。因此,研制无创血糖监测仪成为许多研究机构和生产厂家不遗余力的奋斗目标。本项目以唾液为标本,通过研究Ⅱ型糖尿病患者唾液葡萄糖浓度与血液葡萄糖浓度的关系,探讨不同糖尿病患者血糖浓度与唾液葡萄糖浓度相关性的变化规律。为无创检测探寻理论依据。在此基础上研究高灵敏度的葡萄糖检测方法及检测试纸条,为实现血糖无创监测奠定技术基础。方法:1.根据Trinder报道的方法自行合成新色原TBHBA,调节试剂配制比例及检测参数用全自动分析仪检测唾液葡萄糖浓度。2.唾液的采集方法及比较,分别运用无刺激法和酸刺激法两种方法采集10例糖尿病患者口腔中的混合唾液,对唾液进行唾液量,唾液葡萄糖浓度,及血糖与唾液葡萄糖浓度相关性三方面的比对分析,优选唾液的采集方法。3.唾液葡萄糖浓度与血液葡萄糖浓度相关性的研究,运用自行建立的唾液葡萄糖浓度检测方法检测66例Ⅱ型糖尿病患者的唾液葡萄糖浓度,并与对照组唾液葡萄糖水平进行比较分析,对Ⅱ型糖尿病人群血液葡萄糖与唾液葡萄糖浓度进行相关性分析。在此基础上选取30例Ⅱ型糖尿病患者进行为期一周的餐前餐后血糖与唾液葡萄糖浓度的检测,分析不同Ⅱ型糖尿病患者血液葡萄糖与唾液葡萄糖的相关性,再从上述30个病人中选取10人连续跟踪检测三个月,观察其血液葡萄糖浓度与唾液葡萄糖浓度相关系数的变化规律。4.制作可检测唾液葡萄糖浓度的试纸条,应用重庆天海医疗科技有限公司研发的8位CCD检测器及分析软件检测30例临床标本,与全自动分析法检测结果进行比较。主要结果:1.运用自行合成的新色原TBHBA,通过优化试剂配制比例及检测参数,提高了反应速度,灵敏度提高了51倍,达到了检测唾液葡萄糖浓度的要求。2.66例Ⅱ型糖尿病人群及正常人群唾液葡萄糖检测结果显示:实验组清晨空腹唾液葡萄糖值范围12.3mg/L～46.2mg/L,平均为22.7±6.8mg/L。正常对照组清晨空腹唾液葡萄糖值范围4.2mg/L～12.6mg/L,平均为8.6±1.9mg/L说明Ⅱ型糖尿病患者唾液葡萄糖浓度明显高于正常人唾液葡萄糖浓度;Ⅱ型糖尿病患者唾液葡萄糖浓度与血液葡萄糖浓度有较好的相关性,其相关系数r=0.87。3.3个月的跟踪检测发现不同Ⅱ型糖尿病患者其唾液葡萄糖浓度与血液葡萄糖浓度相关系数有较大差异低值达0.75高值可达0.93,但其餐前血液葡萄糖浓度与唾液葡萄糖浓度的相关系数r值很稳定其变异系数CV＜5%。4.稳定了干化学试纸条的制作工艺,包括冻干方式选择冷冻干燥,确定10g/L白蛋白作为冻干添加剂及调整冻干试剂的比例配置。5.自制的干化学试纸条检测葡萄糖浓度在5mg/L～40mg/L间时有较好的线性关系,该范围涵盖了正常人及Ⅱ型糖尿病患者的唾液葡萄糖水平,可以满足临床检测的需要。结论:1.用自行合成新色原的TBHBA,建立了高灵敏度葡萄糖浓度检测方法,满足了唾液葡萄糖浓度检测的需要。2.通过对正常人和Ⅱ型糖尿病患者唾液葡萄糖浓度与血液葡萄糖浓度关系的研究,发现Ⅱ型糖尿病患者唾液葡萄糖浓度明显高于正常人唾液葡萄糖浓度,且Ⅱ型糖尿病患者唾液葡萄糖与血糖浓度有较好的相关性,其相关系数r=0.87。为以唾液为标本监测血糖浓度奠定了理论基础。3.通过对不同Ⅱ型糖尿病患者的跟踪检测发现其唾液葡萄糖浓度与血液葡萄糖浓度有一定差异,但其餐前血液葡萄糖浓度与唾液葡萄糖浓度的相关系数很稳定,其变异系数CV＜5%。为我们制定个体检测方案提供了理论依据。4.制作了可检测唾液葡萄糖浓度的试纸条,通过与全自动生化仪结果比较,达到了临床初步应用的要求。