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背景:2018年国家癌症中心公布的数据显示,目前乳腺癌是我国女性发病率最高的癌症。在我国,每年新发乳腺癌病例大约为27万,死亡病例大约为6.6万,造成乳腺癌患者死亡的最主要原因是肿瘤细胞发生远处转移。随着医疗技术的发展,乳腺癌的治疗方案不断改进,但对已经发生远处转移的乳腺癌诊疗效果仍不理想。所以积极研究乳腺癌的转移机制有望改善患者的预后。在对肿瘤转移机制的研究中,发现了转移抑制因子,为防治乳腺癌转移、指导临床治疗提供了新思路。CD82是由抑癌基因KAI1编码的细胞膜糖蛋白,属于四跨膜蛋白家族。在机体正常组织细胞中发现其广泛表达,但在多种肿瘤组织表达降低或缺失[1,2],是广谱的肿瘤转移抑制因子。近年来发现CD82棕榈酰化修饰能影响四跨膜蛋白网络的形成,调节蛋白质在细胞膜表面的定位,抑制整合素介导的细胞迁移,并可能影响细胞凋亡过程。但目前研究仍未完全阐明CD82棕榈酰化修饰如何参与调节这一过程及其分子机制。目的:通过对乳腺癌MDA-MB-157、MCF-7和SKBR-3三种细胞中与CD82功能密切相关的三个不同棕榈酰化位点进行突变,观察CD82棕榈酰化对不同乳腺癌细胞表达、增殖、迁移及凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法:分别对乳腺癌细胞CD82棕榈酰化的Cys5、Cys74和Cys83位点进行单点突变和多点联合突变构建CD82棕榈酰化突变体（即Cys5、Cys74、Cys83单位点突变体,和Cys5+Cys74、Cys5+Cys83、Cys74+Cys83、Cys5+Cys74+Cys83的多位点联合突变体）。由中国上海Geen pharma公司完成CD82突变体的慢病毒质粒包装。将合成的慢病毒质粒分别转染MDA-MB-157、MCF-7、SKBR-3三种乳腺癌细胞。以单独的慢病毒载体作为阴性对照即blank组,过表达CD82作为CD82-WT组,不同棕榈酰化位点突变体分别标记为1、2、3、1+2、1+3、2+3、1+2+3。采用qPCR方法检测CD82在RNA水平的表达,Western Blot方法检测CD82在蛋白质水平表达,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞运动和迁移能力,CCK8方法检测细胞增殖活力,流式细胞术分析细胞周期,最后通过Western Blot方法检测CD82棕榈酰化突变后细胞内相关通路活性蛋白的表达,探讨其与肿瘤细胞迁移及凋亡相关的细胞内主要的信号转导通路的影响。结果:1.通过Western Blot和qPCR方法检测CD82在MDA-MB-157、MCF-7和SKBR-3三种不同的乳腺癌细胞株中的表达情况。结果表明:CD 82棕榈酰化突变体转染细胞后,与野生型CD82相比,CD82在Cys 5+Cys 74棕榈酰化共同突变或Cys 83位点棕榈酰化突变后表达显著升高。2.采用划痕方法和Transwell方法检测CD 82棕榈酰化突变对MDA-MB-157、MCF-7和SKBR-3三种不同的乳腺癌细胞运动迁移能力的作用。结果表明:在MDA-MB-157、MCF-7和SKBR-3三种不同的乳腺癌细胞株中,CD82在不同位点的棕榈酰化突变可以不同程度的抑制细胞迁移运动。3.CCK8检测CD 82棕榈酰化突变对MDA-MB-157、MCF-7和SKBR-3三种不同的乳腺癌细胞存活率的影响。结果表明:在SKBR-3乳腺癌细胞株中,不同位点的CD82棕榈酰化突变与野生型CD82相比细胞存活率显著降低。4.采用流式细胞技术检测CD 82棕榈酰化突变对MDA-MB-157、MCF-7和SKBR-3三种不同的乳腺癌细胞细胞周期的影响。结果表明:在MDA-MD-157乳腺癌细胞株中,与CD82-WT相比,CD82在Cys 5位点的棕榈酰化突变可以将细胞阻断在有丝分裂的G2/M期;在SKBR-3乳腺癌细胞株中,CD82在Cys 83位点的棕榈酰化突变可以将细胞阻断在有丝分裂的G2/M期。5.采用Western Blot方法研究CD 82棕榈酰化突变对乳腺癌细胞中与肿瘤细胞的迁移及凋亡相关的细胞内主要的信号转导通路活性的影响。结果表明:CD82棕榈酰化突变对PI3K/AKT信号传导通路没有显著影响;CD82的不同棕榈酰化位点突变能够通过不同凋亡途径使细胞周期阻滞,从而抑制迁移,促使存活率降低。结论:1.CD82在Cys 5和Cys 74位点棕榈酰化共同突变或在Cys 83位点棕榈酰化突变能够激活膜受体凋亡通路。2.CD82在Cys 5位点棕榈酰化突变能够激活线粒体凋亡通路。3.CD82在Cys 74和Cys 83位点棕榈酰化共同突变能够激活内质网凋亡通路。