丹参素对肾脏缺血再灌注损伤早期小鼠TGF-β和IL-6的影响

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目的:通过丹参素干预C57BL/6小鼠肾脏缺血再灌注损伤(Renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)早期模型,探讨丹参素对肾脏缺血再灌注损伤早期小鼠抑炎性因子TGF-β和促炎性因子IL-6水平的影响及其可能的机制。方法:选取80只C57B/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型对照组、丹参素组。对假手术组和模型对照组分别于术前48h、24h,术后即刻、术后12h腹腔注射生理盐水0.13-0.2mL;丹参素低、中、高剂量组分别按照60mg/kg、90mg/kg、120mg/kg剂量腹腔注射丹参素溶液,观察C57B/6小鼠肾脏组织缺血和再灌注颜色变化,检测各组小鼠血清Cre、BUN水平,HE染色观察肾组织形态,ELISA检测各组小鼠血清中TGF-β、IL-6的含量,实时荧光定量PCR法(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)及Western blot法检测各组小鼠肾脏组织中HMGB1、TGF-β、IL-6基因及蛋白的表达水平。结果:HE染色结果显示假手术组肾脏组织形态未出现明显病理变化;模型对照组肾脏组织中肾间质、肾小球充血明显,未见细胞坏死,少量细胞核脱落;丹参素低剂量组可见少量细胞核脱落,肾间质瘀血较多,肾小管和肾小球结构边界较为清晰,肾小管上皮细胞肿胀较明显,上皮细胞刷状缘不清晰。丹参素中剂量组较低剂量组病理损伤程度减轻,可见肾间质瘀血和水肿损伤情况有所降低。丹参素高剂量组可见肾间质瘀血和水肿损伤程度显著降低,只见极少量的瘀血,细胞核未见明显的脱落、坏死和变性。Cre、BUN结果显示:假手术组(20.9567±4.8176、20.4800±4.1523;32.5810±4.7993、32.4580±3.0935)与模型对照组(152.4400±12.3722、149.2389±23.2804;180.1625±16.3115、181.4746±12.7703)、丹参素低中高剂量组(98.9143±5.2083、97.8067±2.9161;144.4681±7.4709、144.4512±8.7314)、(70.7733±4.8737、68.1600±4.6664;125.8293±7.4046、125.4177±5.5491)、(53.6400±10.8774、51.3600±7.5161;87.3347±6.8726、87.3877±7.0966)比较小鼠血Cre、BUN水平均有显著差异(P<0.05);假手术组、模型对照组、丹参素低中高剂量组,缺血后再灌注6h与再灌注12h比较,Cre、BUN无统计学差异(P>0.05)。ELISA检测结果显示:肾损伤模型对照组小鼠6h、12h血清中促炎性因子IL-6的含量(268.5470±1.1031、263.5320±10.5995)高于低剂量组(214.7420±4.9568、207.9870±10.6066)、中剂量组(175.3770±4.6669、167.2270±3.5355)、高剂量组(120.7420±6.6539、107.9370±10.1116),具有统计学意义(P<0.05)。而模型对照组小鼠血清中抑炎性因子TGF-β的含量(68.8321±3.7513、67.6445±1.4313)显著低于低剂量组(90.4224±1.4312、86.2521±1.4142)、中剂量组(118.2478±0.5341、117.0134±3.3918)、高剂量组(264.0188±8.0110、249.5632±4.6998),具有统计学意义(P<0.05)。假手术组、模型对照组、丹参素各组间缺血后再灌注6h与12h相比较,血清中TGF-β、IL-6的含量差异均无统计学意义(P>0.05)。qRT-PCR检测结果显示:假手术组HMGB1mRNA、TGF-βmRNA、IL-6mRNA(0.214±0.004、0.516±0.004、0.321±0.003)与模型对照组(1.628±0.028、2.520±0.028、1.457±0.012)、丹参素高剂量组(0.436±0.022、0.751±0.013、0.530±0.002)、中剂量组(0.709±0.011、1.265±0.0差异49、0.790±0.008)、低剂量组(1.078±0.016、1.955±0.021、1.007±0.009)比较,均有统计学差异(P<0.05)。Western blot结果显示:假手术组的HMGB1、TGF-β、IL-6蛋白表达(0.369±0.028、0.775±0.022、0.201±0.002)与模型对照组(0.867±0.058、0.292±0.037、0.757±0.057)、丹参素高剂量组(0.490±0.005、0.533±0.023、0.306±0.007)、中剂量组(0.585±0.033、0.448±0.223、0.431±0.001)、低剂量组(0.728±0.022、0.364±0.011、0.547±0.003)比较,均具有统计学意义(P<0.05)。结论:丹参素对RIRI早期的肾脏损伤有较好的保护作用,其机制可能与抑制HMGB1进而减少促炎因子IL-6且促进抑炎因子TGF-β的表达和释放有关。
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