论文部分内容阅读
目的:观察补肾健脾活血方对不同LIF表达程度COH模型小鼠种植窗期子宫内膜LIF/MAPK/ERK信号通路的影响,探讨该方在改善超排卵小鼠子宫内膜容受性的可能分子机制,为临床上提高IVF-ET患者妊娠率探索安全有效的中药,并提供相关实验依据。方法:本次研究对象选用SPF级昆明纯种雌性未孕小鼠,原位注射腺病毒以感染小鼠,在各组小鼠子宫内膜LIF表达呈现不同水平的基础上,再构建控制性超排卵小鼠模型,补肾健脾活血方为此次实验研究治疗方。选择6-8周龄SPF级昆明雌性未孕小鼠,体重28.7±1.3g,适应性喂养5天后开始观察动情周期,将有正常动情周期的50只老鼠纳入实验,随机分为5组,每组10只,即空白组（生理盐水组）、模型组（Gn RHa+HMG+HCG组）、模型中药组（Gn RHa+HMG+HCG+补肾健脾活血方组）、下调模型中药组（LIF下调+Gn RHa+HMG+HCG+补肾健脾活血方组）、上调模型中药组（LIF上调+Gn RHa+HMG+HCG+补肾健脾活血方组）,其中下调模型中药组与上调模型中药组小鼠行子宫角开窗术后分别局部注射LIF干扰腺病毒和LIF过表达腺病毒各100μl,其余三组即空白组、模型组、模型中药组行子宫角开窗术后注射等体积生理盐水,腺病毒感染小鼠使其子宫内膜中LIF表达出现不同程度调整后构建控制性超排卵模型:将模型组、模型中药组、下调模型中药组、上调模型中药组小鼠在动情后期每日早上09:00时,腹腔注射阿拉瑞林40μg/100g体质量降调,1天1次,连续注射9天;至用药第9天,加用HMG 40iu/100g体质量促进卵泡发育,1次;48h后腹腔内注射HCG 100iu/100g体质量促排卵,1次;空白组小鼠同时予相应剂量生理盐水注射干预。造模的同时,模型中药组、下调模型中药组、上调模型中药组小鼠予补肾健脾活血方汤药进行灌胃治疗,模型组、空白组小鼠予生理盐水灌胃干预,灌胃剂量均为0.4ml,1日1次,连用11天。注射HCG 48h（小鼠种植窗期）后各组小鼠称重记录,经眼球摘除采血,后脱颈处死,剖腹,取出双角子宫。采用化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）检测各组小鼠血清P表达水平,透射电镜观察小鼠子宫内膜胞饮突结构,分别用免疫组织化学PV二步法、蛋白免疫印迹法检测小鼠子宫内膜LIF、MAPK、ERK、p-ERK蛋白的表达,将结果进行统计学分析。结果:1.与空白组相比,模型组子宫内膜细胞形态学发育不佳,胞饮突数量和体积减少,形态干瘪,表面褶皱增多,表面微绒毛出现,增长且密集,大面积覆盖,即退化阶段胞饮突,小鼠血清P水平明显升高（P＜0.01）,差异有统计学意义,子宫内膜中LIF、MAPK、ERK、p-ERK的表达均降低（P＜0.05）,差异有统计学意义。2.与模型组相比,下调模型中药组子宫内膜细胞形态学变化略有改善,胞饮突由内膜表面略微隆起,突向宫腔,表面仍可见较长微绒毛,即发育期胞饮突;血清P水平无明显差异（P＞0.05）,子宫内膜中LIF的表达升高（P＜0.05）,差异有统计学意义,子宫内膜中MAPK、ERK、p-ERK的表达无显著差异（P＞0.05）;模型中药组与上调模型中药组子宫内膜细胞形态学变化得到明显改善,胞饮突数量增多,体积增大呈饱满状,表面微绒毛完全消失,可见表面完全光滑呈靴状大量聚集的成熟阶段胞饮突,血清P水平较模型组降低（P＜0.05）,差异有统计学意义,子宫内膜中LIF、MAPK、ERK、p-ERK的表达较模型组均明显升高（P＜0.01）,差异有统计学意义。3.与下调模型中药组相比,模型中药组和上调模型中药组子宫内膜细胞形态学变化得到明显改善,血清P水平均降低（P＜0.05）,差异有统计学意义,子宫内膜中LIF、MAPK、ERK、p-ERK的表达均升高（P＜0.05）,差异有统计学意义。4.与模型中药组相比,上调模型中药组子宫内膜细胞形态学变化亦得到明显改善,但血清P水平无明显改变（P＞0.05）;子宫内膜中MAPK、p-ERK的表达高于模型中药组（P＜0.05）,差异有统计学意义,LIF、ERK的表达虽高于模型中药组（P＞0.05）,但差异无统计学意义。结论:1.补肾健脾活血方能有效改善控制性超排卵小鼠子宫内膜细胞形态学变化即胞饮突发育,调节COH小鼠内源性激素的失衡,从而改善COH小鼠子宫内膜容受性。2.补肾健脾活血方通过提高控制性超排卵小鼠子宫内膜LIF蛋白的表达,进而改善COH小鼠子宫内膜容受性。3.补肾健脾活血方上调LIF蛋白表达改善控制性超排卵小鼠子宫内膜容受性可能与激活MAPK/ERK信号转导通路有关。